Mikrobiologické analytické metody pro potřeby mlékárenského průmyslu

Abstract

Teoretická část bakalářské práce je zaměřena na probiotika v mléčných výrobcích a zejména na molekulárně genetické metody využívané k analýze DNA. Pozornost je věnována především metodám stanovení bakteriálních buněk rodu Lactobacillus. Základní technikou je v současné době zejména polymerázová řetězová reakce (PCR), při které dochází k amplifikaci specifických úseků DNA pomocí krátkých oligonukleotidových primerů. V praktické části práce je izolována celková DNA z čisté bakteriální kultury a probiotického mléčného výrobku metodami fenolové extrakce a magnetické separace za využití magnetických nosičů P(GMA) pokrytých karboxylovými funkčními skupinami. Kvalita izolované DNA byla potvrzena amplifikací v PCR za použití primerů specifických pro doménu Bacteria, Lactobacillus a Biffidobacterium.The theoretical part of the thesis is focused on probiotics in dairy products. Thesis deals with molecular genetic methods, which are used to analyze DNA. Especially are discussed methods used for isolation bacterial cells belonging to genus Lactobacillus. The polymerase chain reaction (PCR) is the basic technique at present time. Short chain of oligonucleotide primers are used to amplification specific parts of DNA molecule chain. The practical part of the thesis is focused on the DNA from pure bacterial culture and probiotic dairy product. DNA was isolated using methods of phenol-chloroform extraction and magnetic separation. For magnetic separation was used magnetics particles covered with carbonyl functional groups. Quality of the DNA was confirmed by PCR amplification. Primers specific for domain Bacteria and genus Lactobacillus and Bifidobacterium was used.