Izolace a průkaz DNA z rostlin významných v potravinářství

Abstract

V potravinárstve je veľmi dôležité, aby sa dbalo na kvalitu, bezpečnosť a organoleptické vlastnosti dodávaných produktov. Z tohoto dôvodu sa musia potraviny kontrolovať. Avšak nie všetky informácie vieme zistiť pomocou konvenčných techník ako sú napríklad imunologické testy, chromatografické techniky a podobne. Pre tieto prípady, kedy nezaberajú tradičné postupy, je možné použiť techník na báze DNA. Medzi nimi je najznámejšia technika PCR. Cieľom diplomovej práce bolo vyizolovať DNA zo vzoriek zeleniny (brokolica, repa červená, mrkva a paprika). DNA sa izolovala pomocou metódy s magnetickými časticami a s tradičnou metódou CTAB. S obidvoma metódami sa podarilo izolovať DNA zo vzoriek zeleniny v kvalite a v koncentrácii vhodnej pre PCR, kde sa amplifikoval úsek génu 35S rDNA presnejšie úsek okolo oblasti 18S-ITS–5,8S o približnej veľkosti 700 bp). Po amplifikácií sa PCR produkty podrobili reštrikčným reakciám a výsledky sa porovnali s bioinformatickou analýzou. Týmito krokmi sa podarilo nájsť vhodné enzýmy pre odlíšenie PCR produktov z testovaných druhov zeleniny.In the food industry, it is very important to take care of the quality, safety and organoleptic properties of the products supplied. For this reason, food must be checked. However, not all information can be found using conventional techniques such as immunoassays, chromatographic techniques, etc. DNA-based techniques can be used for these cases where traditional procedures are insufficient. Among them, the best known technique is PCR. The aim of the thesis was to isolate DNA from vegetable samples (broccoli, beetroot, carrot and pepper). DNA was isolated using the magnetic particle method and the traditional CTAB method. Both methods were able to isolate the DNA from the vegetable samples in quality and at a concentration suitable for PCR, where the 35S rDNA gene region was amplified (more precisely about 700 bp of the 18S-ITS1-5,8S region). After amplification, the PCR products were subjected to restriction reactions and the results compared to bioinformatic analysis. These steps have succeeded in finding suitable enzymes for diferentiation of PCR products from the tested vegetable species.