Nepřímá analýza rakovinných markerů pomocí Tag-LIBS s využitím magnetických mikročástic

Abstract

Tato bakalářská práce se zabývá nepřímou detekcí biomarkeru rakoviny prostaty metodou Tag-LIBS. Stanovení biomarkeru bylo provedeno prostřednictvím foton-upkonverzních nanočástic, které jsou spolu s biomarkerem součástí upkonverzní imunoeseje s magnetickými mikročásticemi jako pevnou fází. Použití magnetických mikročástic jako podkladové pevné fáze nabízí velké množství výhod, jako je separace analytu pomocí vnějšího magnetického pole, nebo jejich využití pro vnitřní standardizaci. Metoda Tag-LIBS byla optimalizována vhodně zvoleným dvoupulzním uspořádáním, které v porovnání s jednopulzním vykazovalo vyšší intenzitu signálu a nižší limit detekce biomarkeru. Dále bylo provedeno srovnání upkonverzní imunoeseje, kde byla jako podkladová fáze použita magnetická mikročástice, a upkonverzní imunoeseje na mikrotitrační destičce. K optimalizaci metody Tag-LIBS také přispěla možnost provedení vnitřní standardizace. Byly také analyzovány klinické vzorky, přičemž získané výsledky byly porovnány s výsledky z upkonverzního skenování, které se k detekci upkonverzní imunoeseje běžně používá.This bachelor’s thesis is focused on the indirect detection of the prostate cancer biomarker using the Tag-LIBS method. The determination of the biomarker was carried out using photon-upconversion nanoparticles, which, along with the biomarker, are part of the upconversion-linked immunosorbent assay, with magnetic microparticles as the solid phase. The use of magnetic microparticles as the solid phase offers numerous advantages, such as the separation of analyte using an external magnetic field and their use for internal standardization. The Tag-LIBS method was optimized using a suitably chosen double-pulse arrangement, which exhibited higher signal intensity and a lower limit of detection for the biomarker compared to the single-pulse setup. Furthermore, a comparison was made between the upconversion-linked immunosorbent assay using magnetic microparticles as the solid phase and upconversion-linked immunosorbent assay on a microtiter plate. The optimization of the Tag-LIBS method was also aided by the possibility of performing internal standardization. Clinical samples were also analyzed, and the obtained results were compared with the results from upconversion scanning, which is commonly used for detecting the upconversion-linked immunosorbent assay.