Vývoj probiotického preparátu s účinkem proti celiakii
Loading...
Date
Authors
Korvasová, Lucie
ORCID
Advisor
Referee
Mark
A
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Publisher
Vysoké učení technické v Brně. Fakulta chemická
Abstract
Na onemocnění celiakie a dalších onemocnění související s konzumací lepku nebyla doposud nalezena jiná léčba než celoživotní dieta, která je ovšem značně pro nemocného omezující. Navíc ne vždy je tuto dietu možné zcela dodržet, hlavně vlivem neúmyslného pozření lepku, přičemž nastávají zdravotní komplikace spojené s těmito onemocněními. Jako alternativa léčby je momentálně ve stádiu klinického testování vakcinace a stále více pozornosti se také věnuje enzymům, které by dokázaly rozštěpit imunosekvenční část lepku, konkrétně v jeho gliadinové části. V této práci byly zkoumány bakterie, které by mohly dokázat tuto sekvenci v gliadinu rozštěpit a tím snížit jeho koncentraci při detekci. Značná část testovaných bakterií se řadí mezi probiotika, aby bylo jejich případné budoucí použití pro člověka bezpečné. Pro získání dat se využilo poznatku, kdy s rostoucími bakteriemi roste přímo úměrně i zákal, který byl následně detekován na určení množství nárůstu bakteriální kultury. Pro samotný test na detekci gliadinu se využil kit RIDASCREEN® Gliadin competitive pracující na principu kompetitivní ELISA metody s protilátkami R5. Výsledkem práce bylo zjištění, že ze zkoumaných bakterií byla pouze bakterie Bacillus subtilis schopna štěpit gliadin. Bylo také změřeno, jaké množství gliadinu dokáže při různé koncentraci bakterie rozštěpit a dle dat bylo také vyhodnoceno, že pro větší množství rozštěpeného gliadinu je vhodné kulturu nejprve adaptovat na přítomnost gliadinu.
No other treatment for celiac disease and other gluten-related disorders has been found so far except for a lifelong diet, which is significantly restrictive for the patient. Moreover, it is not always possible to adhere strictly to this diet, mainly due to random gluten ingestion, which leads to health complications associated with these diseases. Currently, vaccination is being tested as an alternative treatment, and there is also increasing attention paid to enzymes that could break down the immunogenic part of gluten, specifically in its gliadin component. This thesis examined bacteria that could potentially break down this sequence in gliadin and thereby reduce its concentration during detection. A considerable proportion of the tested bacteria belong to probiotics to ensure their future use for humans is safe. To obtain data, the fact was utilized that as bacteria grow, the turbidity increases proportionally, which was subsequently detected to determine the amount of bacterial growth. The RIDASCREEN® Gliadin competitive kit was used for the gliadin detection test, which works on the principle of a competitive ELISA method with R5 antibodies. The result of the study was the finding that only the bacteria Bacillus subtilis was able to break down gliadin among the examined bacteria. It was also measured how much gliadin the bacteria could break down at different concentrations, and according to the data, it was evaluated that it is appropriate to adapt the culture to the presence of gliadin for a greater amount of broken gliadin.
No other treatment for celiac disease and other gluten-related disorders has been found so far except for a lifelong diet, which is significantly restrictive for the patient. Moreover, it is not always possible to adhere strictly to this diet, mainly due to random gluten ingestion, which leads to health complications associated with these diseases. Currently, vaccination is being tested as an alternative treatment, and there is also increasing attention paid to enzymes that could break down the immunogenic part of gluten, specifically in its gliadin component. This thesis examined bacteria that could potentially break down this sequence in gliadin and thereby reduce its concentration during detection. A considerable proportion of the tested bacteria belong to probiotics to ensure their future use for humans is safe. To obtain data, the fact was utilized that as bacteria grow, the turbidity increases proportionally, which was subsequently detected to determine the amount of bacterial growth. The RIDASCREEN® Gliadin competitive kit was used for the gliadin detection test, which works on the principle of a competitive ELISA method with R5 antibodies. The result of the study was the finding that only the bacteria Bacillus subtilis was able to break down gliadin among the examined bacteria. It was also measured how much gliadin the bacteria could break down at different concentrations, and according to the data, it was evaluated that it is appropriate to adapt the culture to the presence of gliadin for a greater amount of broken gliadin.
Description
Citation
KORVASOVÁ, L. Vývoj probiotického preparátu s účinkem proti celiakii [online]. Brno: Vysoké učení technické v Brně. Fakulta chemická. 2023.
Document type
Document version
Date of access to the full text
Language of document
cs
Study field
Chemie bioaktivních látek
Comittee
prof. RNDr. Ivana Márová, CSc. (předseda)
doc. Ing. Petr Sedláček, Ph.D. (místopředseda)
prof. Mgr. Václav Brázda, Ph.D. (člen)
doc. Ing. Pavel Diviš, Ph.D. (člen)
doc. RNDr. Renata Mikulíková, Ph.D. (člen)
doc. Ing. Eva Vítová, Ph.D. (člen)
prof. RNDr. Zbyněk Zdráhal, Dr. (člen)
Date of acceptance
2023-05-23
Defence
1. Studentka seznámila členy komise s náplní a cílem diplomové práce.
2. Byly přečteny posudky na diplomovou práci.
3. Studentka akceptovala všechny připomínky oponenta a na všechny otázky odpověděla v plné šíři.
Diskuse:
doc. Ing. Petr Sedláček, Ph.D.
Používala jste adaptaci u všech druhů použitých mikroorganismů?
Jaké jsou nároky na to, aby byla bakterie používána jako probiotická?
prof. Mgr. Václav Brázda, Ph.D.
Během práce jste se věnovala kultivaci buněk, v jaké byly podmínky kultivace? Jaké jste používali médium?
V práci jste používala adaptovanou a neadaptovanou kulturu, jak tyto kultury vznikly? Jak probíhalo přeočkování?
doc. RNDr. Renata Mikulíková, Ph.D.
Jaký je rozdíl mezi sendvičovou a kompetitivní metodou ELISA? Co se měří u kompetitivní ELISY?
doc. Ing. Eva Vítová, Ph.D.
Jak by se výsledný přípravek používal? Jak by probíhalo dávkování?
Studentka odpověděla na všechny doplňující otázky členů komise, které byly v průběhu diskuse k dané problematice vzneseny. V diskusi studentka prokázala výbornou orientaci v dané problematice. Po diskusi následovalo hodnocení závěrečné práce. Diplomantka prokázala nejen výborné odborné znalosti, ale i schopnost samostatné prezentace dosažených výsledků.
Result of defence
práce byla úspěšně obhájena
Document licence
Standardní licenční smlouva - přístup k plnému textu bez omezení