Mikroextrakce DNA z rostlinných tkání zeleniny

Abstract

Diplomová práca bola zameraná na porovnanie dvoch mikroizolačných metód DNA s využitím magnetických častíc z potravín rastlinného pôvodu. Vzorky mali rôznorodé, komplexné matrice a boli v surovom (brokolica, list z jahodníka obecného) alebo technologicky opracovanom stave (jahodový džem). Prvá metóda využíva na manipuláciu magnetických častíc magnetický separátor a slúžila ako štandart pri porovnaní. Druhá metóda využíva paramagnetickú ihlu, ktorej výhodou by mala byť možnosť izolácie DNA vo vyššej kvalite bez výraznej kontaminácie polyfenolickými látkami či proteínmi. Vhodnosť metódy bola vyhodnotená štatistickým porovnaním výsledkov získaných obidvomi metódami. Kvalita DNA bola posúdená testovaním amplifikovatelnosti izolovanej DNA pomocou PCR. Amplifikované produkty boli vizualizované na agarózovom gély pomocou elektroforézy.The aim of the thesis was the comparison of two DNA microextraction methods with the use of magnetic beads from food of plant origin. Samples had disparate and complex matrices and were either raw (broccoli) or processed (strawberry jam). The first method uses a magnetic separator for the manipulation of magnetic beads and was used as a standart for the comparison. The second method uses a paramagnetic needle, the advantage of which should be the possibility to isolate DNA of higher quality without a significant contamination by polyphenolic compounds or proteins. The former method was validated by statistic analysis of results obtained from both methods. DNA quality was judged by testing the amplificability of isolated DNA via PCR. The amplified products were visualised on an agarose gel with electrophoresis.