Analýza vybraných biologicky aktivních látek v cereálních výrobcích

Abstract

Předložená diplomová práce se zabývala studiem biologicky aktivních látek, a to zejména různých typů sacharidů v cereálních výrobcích. V rámci experimentální části bylo použito celkem 29 různých reálných vzorků obilných materiálů, odpadních potravinářských produktů i reálných přírodních matric (mikrobiální polysacharid, med, pivo). Součástí práce bylo zavedení a optimalizace analytických metod vhodných ke stanovení jednoduchých cukrů, polysacharidů a glykosidů. Ve vzorcích byly analyzovány redukující a celkové sacharidy spektrofotometricky a individuální sacharidy pomocí chromatografických metod. V rámci optimalizace byla navržena vhodná mobilní fáze a chromatografické podmínky HPLC/RI pro separaci mono- a disacharidů (acetonitril:voda 75:25, 1 ml/min, kolona C18-NH2) rovněž pro separaci směsi oligosacharidů. Dále byla optimalizována separace sacharidů metodou TLC. Poté byly zavedené metody aplikovány na analýzu reálných vzorků. Jako modelový sacharid k ověření metod byl použit přírodní mikrobiální polysacharid pullulan. V cereálních výrobcích a potravinářských matricích byly analyzovány celkové a redukující sacharidy a dále produkty kyselé a enzymové hydrolýzy. Zavedené metody byly využity také k podrobnějšímu stanovení obsahu sacharidů přítomných v glykosidech. Jako nejvhodnější metoda pro kvalitativní i kvantitativní analýzu sacharidů přítomných v cereálních materiálech se osvědčila metoda HPLC/RI. K detailní identifikaci maltooligosacharidů byla testována i tandemová metoda LC/MS/MS s využitím derivatizace 1-fenyl-3-methyl-5-pyrazolonem.Presented diploma thesis was focused on study of biologically active compounds, especially some sugars in cereal products. In experimental part the total of 29 different cereal materials, food industry waste products and natural complex matrixes (microbial polysaccharide, honey, beer) were used. As a part of this work optimization of analytical methods suitable for analysis of simple sugars, oligo- and polysaccharides was done. In cereal samples reduced and neutral sugars were analyzed spectrophotometrically and individual sugars were detected by chromatography. For HPLC/RI analysis optimal mobile phase composition and chromatography conditions were proposed. For mono- a oligosaccharides C18-NH2 sorbent, mixture acetonitril:water 75:25 as mobile phase and flow 1 ml/min were verified as suitable separation parameters. Thin layer chromatography of mono- and oligosaccharides was optimized too. Introduced chromatography and spectrophotometry methods were then applied to analysis of cereal samples. As a model sugar natural microbial polysaccharide pullulan was used to analytical method testing. In cereal products and food matrixes total neutral and reduced sugars as well as products of their acid and enzyme hydrolysis were measured. Detailed analysis of some glycoside composition was tested too. As the most usable method for both qualitative and quantitative analysis of cereal sugars HPLC/RI method was found. To detailed identification of malto-oligosacharides tandem LC/MS/MS technique using derivatization by 1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolon was tested too.