Využití syntetických protilátek v imunohistochemii

Abstract

Tato práce se zabývá optimalizací přípravy molekulově imprintovaných (MIP) nanočástic, dopovaných ionty kovů, selektivních pro zvolený protein. V této práci byl jako templát zvolen modelový protein – chymotrypsinogen A. Pro přípravu molekulově imprintovaných nanočástic byla použita metoda volné radikálové polymerizace. Jako funkční monomer byl využit dopamin, protože je schopen do sebe vázat ionty kovů, navíc podléha velmi rychlé oxidační polymerizaci v alkalických podmínkách bez potřeby přídavku iniciátorů polymerní reakce. Optimalizace MIP byla provedena pomocí kapilární elektroforézy s UV-Vis detekcí. Takto připravené MIP mohou sloužit jako rozpoznávací elementy v imunohistochemických analýzách, které jako detekční metodu používají LA-ICP-MS. Jejich použitelnost pro imunohistochemii byla studována pomocí metody dotblotu.This diploma thesis deals with the optimization of the preparation of molecularly imprinted (MIP) nanoparticles doped with metal ions, selective for the selected protein. In this work, the model protein – chymotrypsinogen A was chosen as a template. The free radical polymerization method was used for the preparation of molecularly imprinted nanoparticles. Dopamine was used as a functional monomer because it is able to bind metal ions to each other. It also undergoes very rapid oxidative polymerization under alkaline conditions without the need for the addition of polymer reaction initiators. MIP optimization was performed by capillary electrophoresis with UV-Vis detection. The MIP thus prepared can serve as recognition elements in immunohistochemical analyzes that use LA-ICP-MS as a detection method. Their applicability for immunohistochemistry was studied using the dot block method.