Využití metody PCR v reálném čase při mikrobiologické analýze potravin

Abstract

Probiotické druhy bakterií mléčného kvašení rodu Lactobacillus hrají důležitou roli v trávicím traktu člověka, např. chrání před patogenními mikroorganismy. Laktobacily jsou součástí různých potravinových výrobků. Detekovat a identifikovat baktérie mléčného kvašení rodu Lactobacillus lze pomocí polymerázové řetězové reakce (PCR) se specifickými primery LbLMA1 a R16. V experimentální části této práce byla izolována DNA z probiotického výrobku Actimel Natur metodou fenolové extrakce. Pomocí PCR v reálném čase byly amplifikovány specifické produkty PCR, které byly detegovány pomocí fluorescenčního interkalačního barviva SybrGreen. Specificita amplifikovaných produktů PCR byla ověřena pomocí křivky tání (Tm 85°C) a pomocí agarosové gelové elektroforézy (byl amplifikován produkt velikosti 250 bp).Probiotic lactic acid bacteria of genus Lactobacillus play an important role in the digestive tract of human, e.g. protect against pathogenic microorganisms. Lactobacilli are often present in various food products. Lactic acid bacteria of the genus Lactobacillus can be detected by polymerace chain reaction (PCR) using specific primers LbLMA1 and R16. The bacterial DNA was isolated from Actimel Natur probiotic product by the phenol extraction method. DNA was amplified using real time PCR. Specific PCR products were detected using fluorescent intercalaction dye SybrGreen. The specific PCR products were verified by melting curve analysis (Tm 85°C) and by agarose gel electrophoresis (PCR products of 250 bp was amplified).