Korelace mezi měřením stacionární fluorescenční anisotropie na fluorimetru a fluorescenčním mikroskopu

Abstract

Tato práce se zabývá studiem fluorescenční anizotropie na modelovém systému fluorescenční sondy a glycerolu. Fluorescenční látkou je v této práci použito ATTO 488 a jako modelové prostředí byly použity roztoky glycerolu o různých koncentracích k nasimulování různě viskózních prostředí. Měření bylo prováděno na fluorescenčním spektrofluorimetru a na konfokálním fluorescenčním mikroskopu. Byla pozorována lineárně se zvyšující naměřená hodnota anizotropie v závislosti na jednotlivých viskozitách jak u hodnot naměřených na fluorimetru, tak se stejným trendem zvyšující hodnot naměřených na fluorescenčním mikroskopu. Tyto hodnoty byly porovnány a byly stanoveny korekční faktory. Díky Perrinově rovnici bylo výpočtem ověřena správnost měření.This Work concentrates on detection fluorescent anisotropy on a model system of fluorescent probe and glycerol. In this thesis, the ATTO 488 was used as a fluorescent substance and glycerol solutions of different concentrations were used to simulate different viscous environments. A fluorescence spectrofluorometer and confocal fluorescence microscope were used for the measurements. A linear encrease anisotropy with increasing viscosity of the environment was observed on fluorometer. The same trend was detected on fluorescence microscope. The values were compared and correlation factors were determined. The accuracy of the measurement was verified by calculations using the Perrin´s equation.