Příprava a exprese izoforem proteinu p53 pomocí GATEWAY expresního systému
| but.committee | prof. RNDr. Ivana Márová, CSc. (předseda) doc. Ing. Stanislav Obruča, Ph.D. (místopředseda) doc. Ing. Pavel Diviš, Ph.D. (člen) doc. Mgr. Václav Brázda, Ph.D. (člen) doc. Ing. Eva Vítová, Ph.D. (člen) RNDr. Renata Mikulíková, Ph.D. (člen) | cs |
| but.defence | 1. Diplomantka seznámila členy komise s náplní a cílem diplomové práce.2. Byly přečteny posudky na diplomovou práci.3. Diplomantka akceptovala všechny připomínky oponenta a na všechny otázky odpověděla v plné šíři.Diskuseprof. Márová: Proč jste byla ve své práci, s ohledem na provedení velkého množství analýz, při prezentování výsledků tak stručná? Je možné ve vaší práci nalézt i možné uplatnění v potravinářství? Můžete uvést jaká je přesně funkce proteinu p53. Jsou jeho jednotlivé izoformy různě účinné? Podařilo se vám exprimovat všechny izoformy proteinu p53?Po diskuzi následovalo hodnocení závěrečné práce. Diplomantka prokázala výbornou orientaci v dané problematice i schopnost samostatné prezentace získaných výsledků. | cs |
| but.jazyk | slovenština (Slovak) | |
| but.program | Chemie a technologie potravin | cs |
| but.result | práce byla úspěšně obhájena | cs |
| dc.contributor.advisor | Brázda, Václav | sk |
| dc.contributor.author | Wikarská, Monika | sk |
| dc.contributor.referee | Hrstka, Miroslav | sk |
| dc.date.accessioned | 2019-06-14T11:40:00Z | |
| dc.date.available | 2019-06-14T11:40:00Z | |
| dc.date.created | 2019 | cs |
| dc.description.abstract | Produktom tumor-supresorového génu TP53 je proteín p53 a vďaka dvom promótorom a alternatívnemu zostrihu aj jeho 11 izoforiem skrátených z N- a/alebo C- terminálneho konca. Izoformy p53 sa nachádzajú v zdravom aj nádorovom tkanive a vo vzťahu k diagnostike, prognóze a liečbe rakoviny sú intenzívne študované. V tejto práci boli prostredníctvom LR reakcie Gateway systému klonovania pripravené expresné vektory kódujúce sekvencie izoforiem p53 určené na produkciu proteínov baktériami E.coli kmeňa BL-21. Na ich izoláciu afinitnou chromatografiou boli za rovnakým promótorom kódované spolu s dvoma fúznymi proteínmi, glutatión-S-transferázou a polyhistidínovou kotvou. Správnosť inzertov po homológnej rekombinácii bola overená Sangerovou sekvenáciou. Výsledky sekvenácie potvrdili úspešné naklonovanie izoforiem p53, 133p53, 160p53, p53 a 160p53 do expresného vektoru pDEST15-N6xHis-GST-GW-DEST. Proteín 160p53 bol exprimovaný v bunkách BL-21 a izolovaný prostredníctvom oboch značiek. Izoláciou prostredníctvom polyhistidínovej kotvy bola získaná vyššia koncentrácia proteínu ako izoláciou sprostredkovanou interakciou glutatión-S-transferázy. | sk |
| dc.description.abstract | The TP53 gene can express protein p53 and 11 another isoform proteins N- and/or C-terminally truncated by using two promoters and alternative splicing. The p53 isoforms are found in both healthy and tumorous tissues, and are intensively studied in relation to cancer diagnosis, prognosis and treatment. In this work, the p53 isoforms were subcloned into expression vectors by LR reaction adapted from Gateway cloning system. The expression vectors were designed for protein production by bacteria E. coli strain BL-21. The constructs containing p53 isoforms were encoded together with two fusion proteins, glutathione-S-transferase and polyhistidine tag under the control of the same promotor for the affinity chromatography protein isolation. All the clones underwent Sanger sequencing for verification after homologous recombination. Sequencing confirmed the accuracy of the subcloned isoforms p53, 133p53, 160p53, p53 and 160p53 into an expression vector pDEST15-N6xHis-GST-GW-DEST. Protein 160p53 was expressed in BL-21 and isolated using both HIS and GST tag interacion. Isolation using HIS tag yielded in a higher protein concentration then the isolation mediated by the interaction of the glutathione-S-transferase. | en |
| dc.description.mark | A | cs |
| dc.identifier.citation | WIKARSKÁ, M. Příprava a exprese izoforem proteinu p53 pomocí GATEWAY expresního systému [online]. Brno: Vysoké učení technické v Brně. Fakulta chemická. 2019. | cs |
| dc.identifier.other | 115255 | cs |
| dc.identifier.uri | http://hdl.handle.net/11012/177453 | |
| dc.language.iso | sk | cs |
| dc.publisher | Vysoké učení technické v Brně. Fakulta chemická | cs |
| dc.rights | Standardní licenční smlouva - přístup k plnému textu bez omezení | cs |
| dc.subject | proteín p53 | sk |
| dc.subject | izoformy p53 | sk |
| dc.subject | gateway klonovanie | sk |
| dc.subject | protein p53 | en |
| dc.subject | isoforms p53 | en |
| dc.subject | gateway cloning | en |
| dc.title | Příprava a exprese izoforem proteinu p53 pomocí GATEWAY expresního systému | sk |
| dc.title.alternative | Preparation and expression of p53 protein isoforms using the GATEWAY expression system | en |
| dc.type | Text | cs |
| dc.type.driver | masterThesis | en |
| dc.type.evskp | diplomová práce | cs |
| dcterms.dateAccepted | 2019-06-05 | cs |
| dcterms.modified | 2019-06-05-17:35:10 | cs |
| eprints.affiliatedInstitution.faculty | Fakulta chemická | cs |
| sync.item.dbid | 115255 | en |
| sync.item.dbtype | ZP | en |
| sync.item.insts | 2021.11.12 12:08:42 | en |
| sync.item.modts | 2021.11.12 10:58:24 | en |
| thesis.discipline | Potravinářská chemie a biotechnologie | cs |
| thesis.grantor | Vysoké učení technické v Brně. Fakulta chemická. Ústav chemie potravin a biotechnologií | cs |
| thesis.level | Inženýrský | cs |
| thesis.name | Ing. | cs |