Studium vlastností membránového napěťového senzoru ASAP1 exprimovaného v buněčné linii HEK 293
Loading...
Date
Authors
Sanetrníková, Dominika
ORCID
Advisor
Referee
Mark
C
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Publisher
Vysoké učení technické v Brně. Fakulta elektrotechniky a komunikačních technologií
Abstract
Tato práce se v úvodu věnuje seznámení s plasmidovou DNA, která se v podobě vektoru využívá v molekulární biologii. Ve formě fluorescenčních sond lze plasmidy využít pro měření změn membránového potenciálu. Do jejich struktury se přidává barvivo fluorofor. Důležitým zástupcem této práce je fluorescenční sonda ASAP1, která obsahuje zelený fluorescenční protein, jehož reakcí na změnu membránového potenciálu je pokles intenzity emitovaného světla. Cílem práce bylo provést chemickou transfekci tohoto plasmidu do buněčné linie HEK293 a provést jeho charakterizaci. V práci je rovněž navržena metoda pro analýzu časového průběhu změn fluorescence v závislosti na depolarizaci buněčné membrány. V závěru práce je popsán uskutečněný experiment včetně diskuze získaných výsledků.
In the beginning of this thesis is a short introduction into plasmid DNA which is in the form of a vector used in molecular biology. Plasmids can be used in the form of fluorescent probes to measure changes in membrane potential. Into their structure is added a dye called fluorophore. As an important representative of this thesis is a fluorescent probe ASAP1 which contains green fluorescent protein whose response to the membrane potential change is the decrease in the intensity of emitted light. The aim of this thesis was to make chemical transfection of this plasmid into the HEK293 cell line and carry out its characterization. In the work is also described the design of a method for the analysis of the time course of changes in fluorescence depending on the cell membrane depolarisation. In the end of this thesis is also desribed realized experiment including the discussion of aquired results.
In the beginning of this thesis is a short introduction into plasmid DNA which is in the form of a vector used in molecular biology. Plasmids can be used in the form of fluorescent probes to measure changes in membrane potential. Into their structure is added a dye called fluorophore. As an important representative of this thesis is a fluorescent probe ASAP1 which contains green fluorescent protein whose response to the membrane potential change is the decrease in the intensity of emitted light. The aim of this thesis was to make chemical transfection of this plasmid into the HEK293 cell line and carry out its characterization. In the work is also described the design of a method for the analysis of the time course of changes in fluorescence depending on the cell membrane depolarisation. In the end of this thesis is also desribed realized experiment including the discussion of aquired results.
Description
Keywords
napěťový senzor, fluorescenční sonda, Accelerated Sensor of Action Potentials 1, ASAP1, zelený fluorescenční protein, GFP, HEK293, transfekce, patch-clamp, voltage sensor, fluorescent probe, Accelerated Sensor of Action Potentials 1, ASAP1, green fluorescent protein, GFP, HEK293 cells, transfection, patch-clamp
Citation
SANETRNÍKOVÁ, D. Studium vlastností membránového napěťového senzoru ASAP1 exprimovaného v buněčné linii HEK 293 [online]. Brno: Vysoké učení technické v Brně. Fakulta elektrotechniky a komunikačních technologií. 2016.
Document type
Document version
Date of access to the full text
Language of document
cs
Study field
Biomedicínské inženýrství a bioinformatika
Comittee
prof. Ing. Valentýna Provazník, Ph.D. (předseda)
doc. RNDr. Martin Kovár, Ph.D. (místopředseda)
Ing. Jan Odstrčilík, Ph.D. (člen)
Ing. Jan Červený, Ph.D. (člen)
Ing. Vratislav Čmiel, Ph.D. (člen)
Date of acceptance
2016-06-08
Defence
Student prezentoval výsledky své práce a komise byla seznámena s posudky.
Ing. Čmiel položil otázku: jak jste realizovala snímání? Jakou jste použila kameru? Znáte časové zpoždění barviva?
Doc. Kovár položil otázku: s jakou chybou bylo měřeno?
Ing. Čmiel položil otázku: docházelo k šumu kamery? Kolik buněk jste naměřila? Proč je nejmenší hodnota pixelu 120?
Ing. Červený položil otázku: byla vyhodnocována reprodukovatelnost?
Prof. Provazník položil otázku: jak časově náročné je měření?
Student obhájil diplomovou práci s výhradami a odpověděl na otázky členů komise a oponenta.
Result of defence
práce byla úspěšně obhájena
Document licence
Standardní licenční smlouva - přístup k plnému textu bez omezení