Biotechnologická produkce PHA pomocí extremofilních mikroorganismů

Abstract

Tato bakalářská práce se zabývá studiem produkce polyhydroxyalkanoátů (PHA) bakteriálním kmenem Halomonas salina (CCM 4361T). V teoretické části jsou zpracovány vlastnosti a biosyntéza PHA a charakteristika extremofilních bakterií. Experimentální část je zaměřena na kultivaci bakterie na různých substrátech a koncentracích soli v médiu pro optimální produkci PHA. Množství biomasy a PHA bylo analyzováno pomocí spektrofotometrické metody a plynové chromatografie s FID detekcí. Pro produkci PHA byla nejlepším substrátem vyhodnocena fruktóza, kdy bylo dosaženo 12,55% PHB v biomase. Optimální koncentrace NaCl byla dosažena při 80 g/l. Bakterie byla testována pomoci polymerázové řetězové reakce (PCR) a detekována gelovou elektroforézou. Testování prokázalo obsah phaC genu, který kóduje klíčový enzym biosyntézy PHA - PHA syntázu.This bachelor thesis is focused on study of production of polyhydroxyalkanoates (PHA) by bacteria Halomonas salina (CCM 4361T). Theoretical part deals with the properties and biosynthesis of PHA and chracterization of extremophiles bacteria. The experimental part is focused on cultivation of bacteria on different substrates and concentration of sodium chloride in medium for optimal production of PHA. Content of biomass and PHA were analyzed by spektrofotometry and gass chromatography with FID. The fructose proved to be the most suitable substrate for a production of PHA, with a content of 12,55 % of PHA in biomass. Optimal concetration of NaCl was found at 80 g/l. Bacteria were investigated by molecular technique polymerase chain reaction (PCR) and detected by gel elctrophoresis. Test confrimed opresence of phaC gene encoding for PHA synthase, enzyme which is necessary for PHA biosynthesis.