pH citlivé fluorescenční sondy

Abstract

Cílem této práce bylo navrhnout vhodnou metodu pro měření pH bakteriálního cytosolu v bakteriích kmene Cupriavidus necator. Pro získání skenu bakterií byla zvolena fluorescenční mikroskopie a časově rozlišené fluorescence pro získání kalibrační křivky. Nejideálnější sondou, kterou bylo možno využít, byl BCECF-AM. Bylo navrženo, že pro prokaryotický typ buněk je vhodnější použít externí kalibraci než interní. Bakterie s označením H16 vykazují dlouhou dobu života pouze na granulích s obsahem PHB, zatímco u bakterií typu PHB-4 se nejdelší doba života vyskytuje náhodně v celé buňce.The goal of this thesis was to suggest the suitable method for measuring bacterial cytosolic pH in bacteria strain Cupriavidus necator. Fluorescent microscopy was chosen to obtain scan of bacteria and time-resolved fluorescence was chosen to obtain a calibration curve. BCECF-AM was used as a pH-sensitive fluorescent probe. It was suggested that the external calibration is more suitable than internal one for the prokaryotic type of cells. Bacteria H16 shows a long fluorescence lifetime only on the granules containing PHB, while in PHB-4 the longest fluorescence lifetime occurs randomly throughout the cell.