Testování biologického účinku glukanů na buněčných liniích in vitro
Loading...
Date
Authors
Šimková, Eva
ORCID
Advisor
Referee
Mark
A
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Publisher
Vysoké učení technické v Brně. Fakulta chemická
Abstract
Cílem této bakalářské práci je izolace a testování -glukanů z vybraných kmenů kvasinek. V teoretické části je vypracována charakterizace -glukanů, mikrobiální produkce -glukanů kvasinkami, stanovení polysacharidů, exopolysacharidů a testování in vitro. Kvasinky mají buněčnou stěnu tvořenou -glukany. -glukany jsou známy pro své léčivé účinky. Experimentální část bakalářské práce se zabývá charakterizací vybraných biomas kvasinek v různých formách, srovnáním jejich účinků a množství -glukanů v jednotlivých formách. Byly vybrány kmeny kvasinek Metschnikowia pulcherrima, Cystofilobasidium infirmominiatum a Rhodotorula kratochvilovae. Následně se práce zabývá izolací a testováním izolovaných -glukanů zvybraného lyofilizovaného kmene kvasinek Rhodotorula kratochvilovae. Vybraný kmen byl izolován 2 způsoby. První způsob izolace, který byl šetrnější ke konformaci -glukanů díky působení ultrazvukové homogenizace buněk. Druhý způsob izolace byl méně šetrný ke -glukanům, pro jejich homogenizaci se využívala kyselina a zásada. Analýzy obou extrakčních metod potvrdily přítomnost izolovaných -glukanů, nicméně bylo zjištěno, že výtěžnost obou metod byla poměrně nízká a vyžaduje další optimalizaci postupu. Celkově lepším extrakčním postupem byla metoda II. Vzorek tohoto extraktu byl dále testován na buněčné linii HaCaT. Výsledky pilotních testů potvrdily cytotoxicitu u námi získaného extraktu.
The aim of this bachelor thesis is isolation and testing of -glucans from selected strains of yeast. In the theoretical part, characterisation of -glucans, microbial production of -glucans by yeast, determination of polysaccharides, exopolysaccharides and in vitro testing are described. Yeast have a cell wall made up of -glucans and -glucans are known for their healing properties. In the experimental part of this work deals with characterization of selected biomass yeasts in different forms and comparison of their effects and the amount of -glucans in each form. Stains of Metschnikowia pulcherrima, Cystofilobasidium infirmominiatum and Rhodotorula kratochvilovae have been selected for this thesis. Subsequently, the thesis deals with the isolation and testing of isolated -glucans from a selected lyophilised strain of yeast Rhodotorula kratochvilovae. The selected strain was isolated in 2 ways. The first method of isolation that was more friendly to conformation of -glucans due to the effect of ultrasonic homogenization of cells. The second method of isolation was less friendly to -glucans, using acid and base to homogenise them. Analyses of both extraction methods confirmed the presence of isolated -glucans, however it was found that the recovery of both methods was relatively low and requires further optimisation of the procedure. Overall, the better extraction procedure was the second method. A sample of this extract was further tested on the HaCaT cell line. The results of the pilot tests confirmed the cytotoxicity of the extract obtained by us.
The aim of this bachelor thesis is isolation and testing of -glucans from selected strains of yeast. In the theoretical part, characterisation of -glucans, microbial production of -glucans by yeast, determination of polysaccharides, exopolysaccharides and in vitro testing are described. Yeast have a cell wall made up of -glucans and -glucans are known for their healing properties. In the experimental part of this work deals with characterization of selected biomass yeasts in different forms and comparison of their effects and the amount of -glucans in each form. Stains of Metschnikowia pulcherrima, Cystofilobasidium infirmominiatum and Rhodotorula kratochvilovae have been selected for this thesis. Subsequently, the thesis deals with the isolation and testing of isolated -glucans from a selected lyophilised strain of yeast Rhodotorula kratochvilovae. The selected strain was isolated in 2 ways. The first method of isolation that was more friendly to conformation of -glucans due to the effect of ultrasonic homogenization of cells. The second method of isolation was less friendly to -glucans, using acid and base to homogenise them. Analyses of both extraction methods confirmed the presence of isolated -glucans, however it was found that the recovery of both methods was relatively low and requires further optimisation of the procedure. Overall, the better extraction procedure was the second method. A sample of this extract was further tested on the HaCaT cell line. The results of the pilot tests confirmed the cytotoxicity of the extract obtained by us.
Description
Citation
ŠIMKOVÁ, E. Testování biologického účinku glukanů na buněčných liniích in vitro [online]. Brno: Vysoké učení technické v Brně. Fakulta chemická. 2021.
Document type
Document version
Date of access to the full text
Language of document
cs
Study field
Biotechnologie
Comittee
prof. RNDr. Ivana Márová, CSc. (předseda)
prof. Ing. Stanislav Obruča, Ph.D. (místopředseda)
doc. Ing. Pavel Diviš, Ph.D. (člen)
prof. Mgr. Václav Brázda, Ph.D. (člen)
prof. Ing. Adriána Kovalčík, Ph.D. (člen)
Date of acceptance
2021-08-31
Defence
1. Studentka seznámila členy komise s náplní a cílem bakalářské práce.
2. Byly přečteny posudky na bakalářskou práci.
3. Studentka akceptovala všechny připomínky oponenta a na všechny otázky odpověděla v plné šíři.
Diskuse:
prof. Márová: Proč jste nepoužily stejné humánní buněčné linie na testování pigmentů i glukanů? Myslíte si, že testované látky ovlivňují proliferaci buněk?
doc. Obruča: Myslíte si, že při testování kvasinky rostly v médiu společně s kožními buňkami?
doc. Brázda: Je možné testovanou biomasu využít v potravinářství, nebo jako krmivo?
Studentka zodpověděla všechny doplňující otázky členů komise, které byly v průběhu diskuze k dané problematice vzneseny. Po diskusi následovalo hodnocení závěrečné práce. Studentka prokázala výbornou orientaci v dané problematice i schopnost samostatné prezentace získaných výsledků.
Result of defence
práce byla úspěšně obhájena
Document licence
Standardní licenční smlouva - přístup k plnému textu bez omezení