Fyzikálně-chemická charakterizace 3-hydroxybutyrátu ve vztahu k jeho bioprotektivním účinkům

Abstract

Hlavným cieľom práce bolo overiť bioprotektívne vlastnosti 3-hydroxybutyrátu (3HB) z hľadiska jeho vplyvu na denaturáciu proteínu (konkrétne lipázy) a stanoviť relevantné fyzikálno-chemické charakteristiky 3HB, ktoré by mohli viesť k vysvetleniu mechanizmu tohto ochranného efektu. Rešeršná časť práce sa zamerala predovšetkým na mechanizmus ochranného účinku tzv. kompatibilných solutov, medzi ktoré patrí 3HB. Ochranný účinok 3HB bol stanovený metódou dynamického rozptylu svetla (DLS). Ako ďalšie parametre vodného roztoku 3HB boli stanovené: koncentračná závislosť povrchového napätia 3HB, vplyv rôznych koncentrácií 3HB na zeta potenciál lipázy. Hydrofílny/hydrofóbny charakter 3HB bol charakterizovaný parametrom log Kow. Pre kvantitatívne stanovenie 3HB vo vodnom roztoku bola optimalizovaná jednoduchá metóda. Touto metódou je nepriama spektroskopia. Je založená na konverzii 3HB na krotonovú kyselinu v prítomnosti kyseliny sírovej za zvýšenej teploty.The main aim of the work was to verify bio-protective properties of 3-hydroxybutyrate (3HB) in terms of its effect on protein denaturation (especially lipase) and determine the physicochemical characteristics of 3HB that could lead to the explanation of the mechanism of its protective effect. The literature search focused primarily on the mechanism of the protective effect of the compatible solutes. The 3HB belongs to the group of compatible solutes. The protective effect of the 3HB was monitored by Dynamic Light Scattering (DLS). As the other parameters of the aqueous solution 3HB were determined: the dependence of the surface tension on the concentration of the 3HB, the effect of different 3HB concentrations on the zeta potential of the lipase. Hydrophobic and hydrophilic character of the 3HB was characterized with the log Kow parameter. A simple method for quantity determination of the 3HB aqueous solution was optimized. The method is based on conversion of the 3HB into crotonic acid by reaction with sulphuric acid at higher temperatures and on subsequent psectrophotometric determination of the amount of crotonic acid.