Stanovení autenticity potravin rostlinného původu pomocí molekulárních metod

Abstract

Předložená diplomová práce je zaměřena na stanovení autenticity ovocných výživ určených pro ranou dětskou výživu pomocí molekulárních metod. V experimentální části byla provedena pomocí kitu izolace rostlinné DNA z ovoce (jahoda, meruňka, malina, jablko) a z šesti komerčních výrobků pro děti. Izolovaná DNA byla charakterizována a ověřena metodou PCR s primery specifickými pro rostlinnou rDNA (ITS2). Byly vybrány specifické páry primerů pro amplifikaci DNA z jednoho ovocného druhu. Specifičnost primeru byla hodnocena u čtyřech ovocných druhů. Ke stanovení citlivosti testu multiplex PCR byla použita směs ovocného pyré ze dvou plodů. Aby byla ověřena použitelnost navrhnuté multiplex PCR, bylo analyzováno pomocí této metody šest ovocných komerčních výrobků. Předkládaná metodika detekce ovoce pomoci qPCR a multiplex-qPCR (duplex) zahrnuje takové metodické přístupy, které umožňují diagnostikovat dva druhy ovoce (jahoda-malina, meruňka-jablko) v jedné reakci, čímž snižují ekonomické i časové nároky potřebné pro detekci.The aim of presented diploma thesis was to determination of authenticity of fruit baby foods for early infant feeding using molecular methods. In the experimental part, isolation kit was used for isolation of plant DNA from fruits (strawberry, apricot, raspberry, apple) and from six commercial fruit products for children. Isolated DNA was characterized and verified using PCR methods with primers specific for plant rDNA (ITS2). Specific primer pairs were designed to amplify DNA for the detection of one fruit species. Primer specificity was assessed with four fruit species. A mixture of fruit puree from the two fruits was used to determine the sensitivity of the multiplex PCR assay. Six commercial fruit products were evaluated to verify the applicability of the multiplex PCR assay. The methodology of molecular detection of fruit DNA by qPCR and multiplex qPCR (duplex) includes approaches, which enable to detect two fruits (strawberry-raspberry, apricot-apple) in one reaction and thus reduces time and money requirements.