Stanovení autenticity potravinářských výrobků s ovocnou složkou
Loading...
Date
Authors
ORCID
Advisor
Referee
Mark
A
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Publisher
Vysoké učení technické v Brně. Fakulta chemická
Abstract
Cieľom predloženej diplomovej práce bolo stanovenie autenticity detských ovocných výživ pomocou molekulárnych a inštrumentálnych metód. V experimentálnej časti boli vykonané izolácie rastlinných DNA z listov ovocia (broskyne, marhule, slivky a jablka) a plod banánovníka. Izolácia bola vykonaná aj z piatich komerčných výrobkov, a z modelových zmesí, ktoré boli pripravené obsahovo identicky ku komerčným zmesiam. Izolovaná DNA bola charakterizovaná a overená qPCR s primermi ITS2 špecifickými pre rastlinnú DNA. Boli vybraté tri trojice párov primerov, u ktorých bola zhodnotená ich špecifickosť pre multiplex PCR. Táto metóda umožňuje diagnostikovať viac druhov ovocia v jednej reakcii, čím sa znižujú ekonomické aj časové nároky potrebné pre detekciu. Keďže pre marhuľu nebol dostatočne špecifický žiaden z vybratých párov primerov, ďalej sa pokračovalo len v dôkaze slivky a broskyne pomocou duplex PCR. Pre lepšie rozoznanie typu DNA bola použitá vysokorozlišovacia analýza kriviek topenia. Následne bola vykonaná elektroforéza na agarózovom géle, ktorá odhalila dĺžku fragmentov. Ďalej bola snaha identifikovať špecifické fenolové látky v komerčných a modelových pyré pomocou HPLC, ale keďže tieto látky sú pri nevhodných skladovacích podmienkach degradabilné, nepodarilo sa dokázať prítomnosť individuálnych látok touto metódou.
The aim of this thesis was to determine the authenticity of fruit food for infants using molecular and instrumental methods. In the experimental part, plant DNA isolations from fruit leaves (peaches, apricots, plums and apples) and bananas were performed. Further, DNA was isolated also from five commercial products, and from model mixtures that were prepared in terms of content identical to the commercial mixtures. The isolated DNA was characterized and verified by qPCR with plant DNA-specific ITS2 primers. Three triple primer pairs were selected, and their specificity was evaluated when performing multiplex PCR. This method makes it possible to detect more types of fruit in one reaction, reducing the economic and time requirements for detection. As none of the selected primer pairs were sufficiently specific for the apricot, the evidence from the plum and peach was further realized using duplex PCR. High resolution melting curve analysis was used for better DNA type recognition. Subsequently, agarose gel electrophoresis was performed to analyse the fragment lengths. Furthermore, experiments have been made to identify some specific phenolic substances in commercial and model fruit mixtures by HPLC. Since phenolic substances are degradable under unsuitable storage conditions, the presence of individual compounds was not detected by this method.
The aim of this thesis was to determine the authenticity of fruit food for infants using molecular and instrumental methods. In the experimental part, plant DNA isolations from fruit leaves (peaches, apricots, plums and apples) and bananas were performed. Further, DNA was isolated also from five commercial products, and from model mixtures that were prepared in terms of content identical to the commercial mixtures. The isolated DNA was characterized and verified by qPCR with plant DNA-specific ITS2 primers. Three triple primer pairs were selected, and their specificity was evaluated when performing multiplex PCR. This method makes it possible to detect more types of fruit in one reaction, reducing the economic and time requirements for detection. As none of the selected primer pairs were sufficiently specific for the apricot, the evidence from the plum and peach was further realized using duplex PCR. High resolution melting curve analysis was used for better DNA type recognition. Subsequently, agarose gel electrophoresis was performed to analyse the fragment lengths. Furthermore, experiments have been made to identify some specific phenolic substances in commercial and model fruit mixtures by HPLC. Since phenolic substances are degradable under unsuitable storage conditions, the presence of individual compounds was not detected by this method.
Description
Citation
PRACHÁROVÁ, A. Stanovení autenticity potravinářských výrobků s ovocnou složkou [online]. Brno: Vysoké učení technické v Brně. Fakulta chemická. 2021.
Document type
Document version
Date of access to the full text
Language of document
sk
Study field
Potravinářská chemie a biotechnologie
Comittee
prof. RNDr. Ivana Márová, CSc. (předseda)
doc. Ing. Pavel Diviš, Ph.D. (místopředseda)
doc. Ing. Stanislav Obruča, Ph.D. (člen)
prof. Ing. Stanislav Kráčmar, DrSc. (člen)
doc. Ing. Eva Vítová, Ph.D. (člen)
doc. Mgr. Václav Brázda, Ph.D. (člen)
Date of acceptance
2021-09-09
Defence
1. Studentka seznámila členy komise s náplní a cílem diplomové práce.
2. Byly přečteny posudky na diplomovou práci.
3. Studentka akceptovala všechny připomínky oponentky a na všechny otázky odpověděla v plné šíři.
Diskuse:
doc. Diviš: Jak byly extrahovány fenolické látky pro stanovení na HPLC?
doc. Vítová: Vy jste si sama připravovala dětskou přesnídávku s obsahem detekovaných druhů ovoce. Tento test byl proveden k ověření funkčnosti metody?
doc. Brázda: Jak jste získala sekvence využívaných primerů, kdo je navrhoval a na jakou specifickou část jsou cíleny? V jakém programu jste dělala citace?
Studentka odpověděla na všechny doplňující otázky členů komise, které byly v průběhu diskuze k dané problematice vzneseny. Po diskusi následovalo hodnocení závěrečné práce. Diplomantka prokázala výborné odborné znalosti a rovněž schopnost samostatné prezentace dosažených výsledků.
Result of defence
práce byla úspěšně obhájena
Document licence
Standardní licenční smlouva - přístup k plnému textu bez omezení