Využití magnetických mikročástic pro izolaci DNA

Abstract

V rámci diplomové práce byla studována efektivita magnetických mikročástic při izolaci DNA bakteriálního kmene Lactobacillus rhamnosus CCM 1825T a DNA z kuřecích erytrocytů. K izolaci byly použity magnetické mikročástice na bázi HEMA, pokryté karboxylovými skupinami, a hypersíťované styren-divinylbenzenové částice (Ústav makromolekulární chemie AV ČR, Praha). Jako kontrola byly použity komerční magnetické mikročástice Dynabeads® DNA DIRECT™ Universal (Dynal, Norsko) na bázi polystyrenu a částice MPG® Uncoated (PureBiotech, USA) na bázi magnetického skla. Sledována byla závislost množství izolované DNA na výchozí koncentraci DNA v roztoku a závislost množství izolované DNA na koncentraci magnetických mikročástic. Rovněž byla sledována afinita magnetických mikročástic k RNA a to pro různé výchozí koncentrace RNA v roztoku. Testované nosiče byly použity při izolaci DNA z reálného vzorku (mléčný výrobek Actimel). Kvalita separované DNA rodu Lactobacillus byla prokázána pomocí rodově specifické PCR.The effectiveness of magnetic microparticles in isolation of DNA from Lactobacillus rhamnosus CCM 1825T and DNA from chicken erythrocytes were studied in diploma thesis. Magnetic HEMA based microparticles coated by carboxylic groups and hyperbranched styrene-divinylbenzene particles (IMC AS ČR, Prague, Czech Republic) were used for DNA isolation. Magnetic microparticles Dynabeads® DNA DIRECT™ Universal (Dynal, Norway) based on polystyrene and MPG® Uncoated (PureBiotech, USA) based on magnetic glass were used as a control. The dependence of amount of eluted DNA on concentration of DNA in the base solution and the dependence of amount of eluted DNA on concentration of magnetic microparticles were studied. The affinity of magnetic microparticles to RNA for various concentrations of RNA solution was studied, too. The ability of tested particles to isolate DNA from real samples was validated using milk product Actimel. The quality of isolated DNA of Lactobacillus genus was proved using genus specific PCR.