Izolace částic fotosystému II a jejich charakteristika

Abstract

Táto diplomová práca sa zaoberá izoláciou a charakterizáciou špenátových tylakoidných membrán a častíc fotosystému II. Na základe rešerše boli zvolené dva postupy izolácie špenátových tylakoidných membrán a postup izolácie častíc fotosystému II s dôrazom na zachovanie ich natívnych vlastností. Následne boli prevedené charakterizácie so zameraním na spektroskopické vlastnosti vyizolovaných vzoriek. UV-VIS spektrometria bola použitá na stanovenie pomeru chlorofylu a ku chlorofylu b vo vzorkách tylakoidných membrán a častíc fotosystému II. Fluorescenčnými metódami bola potvrdená úspešnosť izolácií. Metódou ustálenej fluorescenčnej spektroskopie boli premerané excitačné a emisné spektrá vzoriek a časovo rozlíšenou fluorescenciou boli stanovené doby života fluorescencie vzoriek tylakoidných membrán a častíc fotosystému II. Izolované vzorky boli následne vizualizované fluorescenčným mikroskopom s CCD kamerou a technikou FCS.This master's thesis deals with the isolation and characterization of spinach thylakoid membranes and photosystem II particles. Based on the research, two procedures were chosen for the isolation of spinach thylakoid membranes and photosystem II particles with an emphasis on preserving their native properties. Subsequently, the characterizations were carried out, focusing on the spectroscopic properties of the isolated samples. UV-VIS spectrometry was used to determine the ratio of chlorophyll a to chlorophyll b in samples of thylakoid membranes and photosystem II particles. The success of the isolations was confirmed by fluorescence methods. The excitation and emission spectra of the samples were measured by the steady-state fluorescence spectroscopy, and the fluorescence lifetimes of the samples of thylakoid membranes and photosystem II particles were determined by time-resolved fluorescence. The isolated samples were afterwards visualized with a fluorescence microscope with a CCD camera and the FCS technique.