Identifikace bakterií mléčného kvašení v tvrdých sýrech s využitím amplifikačních metod

Abstract

Diplomová práce byla zaměřena na identifikaci bakterií mléčného kvašení druhu Lactococcus lactis a poddruhů Lactococcus lactis ssp. lactis a Lactococcus lactis ssp. cremoris pomocí druhově a subdruhově specifické polymerázové řetězové reakce (PCR). Metoda PCR byla použita k identifikaci bakterií druhu Lactococcus lactis v 10 vzorcích tvrdých sýrů. Byl vypracován postup přípravy vzorků tvrdých sýrů pro získání dostatečného množství buněk a přípravu hrubých lyzátů buněk. Celková DNA v kvalitě vhodné pro PCR byla izolována použitím magnetických částic P(HEMA-co-GMA) v přítomnosti polyethylenglykolu (PEG 6000) a chloridu sodného. Jako kontrola izolace byla použita DNA izolovaná metodou fenolové extrakce. PCR byla rovněž použita k analýze 7 kmenů Sbírky mlékařských mikroorganismů Laktoflora (CCDM). U těchto kmenů bylo subdruhově specifickou PCR prokázáno zařazení 5 kmenů do poddruhu Lactococcus lactis ssp. lactis a 2 kmenů do poddruhu Lactococcus lactis ssp. cremoris.Diploma thesis was focused on identification of lactic acid bacteria of species Lactococcus lactis and subspecies Lactococcus lactis ssp. lactis and Lactococcus lactis ssp. cremoris using species and subspecies specific polymerace chain reaction (PCR). PCR method was used for identification of bacteria of species Lactococcus lactis in 10 samples of hard cheeses. The method of sample preparation was evaluated for hard cheeses with the aim to receive sufficient amount of cells for the preparation of crude cell lysates. Whole DNA in quality suitable for PCR was separated using magnetic microspheres P(HEMA-co-GMA) in the presence of polyethylenglycol (PEG 6000) and sodium chloride. DNA isolated by phenol extraction was used as control of DNA isolation. PCR was used to the analysis of 7 strains of Lactococcus lactis from Collection of dairy microorganisms Laktofora (CCDM). Altogether 5 or 2 strains were identified into subspecies Lactococcus lactis ssp. lactis and Lactococcus lactis ssp. cremoris, respectively.