DVOŘÁKOVÁ, P. Využití kapalinové chromatografie pro stanovení reziduí léčiv [online]. Brno: Vysoké učení technické v Brně. Fakulta chemická. 2012.
Ing. Petra Dvořáková, roz. Ženatová, nastoupila na doktorské studium studijního oboru Chemie a technologie ochrany životního prostředí v roce 2009/2010, bezprostředně po ukončení magisterského studijního programu ve stejném studijním oboru. Pokračovala v řešení problematiky, kterou se zabývala již ve své diplomové práci, a to stanovením reziduí léčiv pomocí metody kapalinové chromatografie. Během doktorského studia složila Ing. Petra Dvořáková všechny předepsané zkoušky a splnila veškeré pedagogické povinnosti předepsané studijním a zkušebním řádem DSP. Kromě toho řešila i některé další úkoly, které souvisely s chodem Ústavu chemie a technologie ochrany životního prostředí FCH VUT v Brně. V průběhu svého pedagogického působení participovala na výuce analytické chemie, kde vedla praktická cvičení a zajišťovala výuku některých speciálních úloh v rámci předmětů Praktická cvičení z instrumentální a strukturní analýzy a Praktická cvičení z environmentální analýzy. V průběhu svého doktorského studia řešila rovněž dva projekty FRVŠ, a to jako hlavní řešitelka i jako spoluřešitelka. Kromě toho si zvyšovala své teoretické vědomosti také tak, že prostudovala značné množství odborné literatury; v důsledku toho zpracovala hodnotnou rešerši a tak byla výborně připravena na řešení experimentálních úkolů. Aby získala maximální teoretické i praktické poznatky z oblasti instrumentální analýzy, zúčastnila se celé řady krátkodobých i dlouhodobých školení organizovaných VŠCHT v Praze, UK v Praze, MU v Brně a Akademií věd ČR, případně firmami dodávajícími příslušnou přístrojovou techniku, a to především v oblasti kapalinové chromatografie a hmotnostní spektrometrie. Aby zvládla problematiku stanovení reziduí léčiv ve vodním ekosystému, musela si Ing. Petra Dvořáková osvojit velké množství preanalytických i analytických technik, převážně z oblasti separačních metod. V průběhu zpracování své disertační práce zvládla dokonale veškerou laboratorní techniku, kterou pro svá měření používala, především si dokonale osvojila techniku LC, a to ve spojení s detektory DAD a MS. Protože na FCH VUT v Brně patřila k excelentním pracovníkům v oblasti separačních metod, pomáhala v průběhu svého doktorského studia celé řadě studentů při řešení jejich experimentů, souvisejících s jejich bakalářskými a diplomovými pracemi. Výsledky své práce průběžně prezentovala na seminářích, konferencích a sympoziích v ČR i v zahraničí, zde převážně formou posterů. V rámci projektu Ceepus, organizovaného ve Slovinsku spolu se symposiem EMEC, se zúčastnila speciální školy separačních metod, kde měla svoji prezentaci ve formě přednášky. Proto mohu konstatovat, že výsledky výzkumné i pedagogické činnosti Ing. Petry Dvořákové jsou přínosem nejen pro obor Chemie a technologie ochrany životního prostředí, v rámci kterého obhajuje svoji disertační práci, ale především také pro edukační a výzkumnou činnost prováděnou na celé FCH VUT v Brně. Na základě uvedených skutečností lze konstatovat, že Ing. Petra Dvořáková předložila hodnotnou disertační práci, která je zaměřená na problematiku stanovení reziduí léčiv přítomných ve vodním ekosystému a obsahuje řadu prioritních výsledků. Na základě toho doporučuji přijmout její práci k obhajobě a jmenované udělit po jejím úspěšném průběhu vědeckou hodnost Ph.D. Brno, 30.6.2012 prof. RNDr. Milada Vávrová, CSc., školitel
Předložená dizertační práce Ing. Petry Dvořákové se zaměřila na skutečně aktuální téma. Výskyt reziduí farmak ve vodním ekosystému, kam pronikají z komunálních či nemocničních odpadů, někdy i přes bariéru čistíren odpadních vod (ČOV), eventuálně dalších emisních zdrojů, je spojen s celou řadou ekotoxikologických rizik. Pro sledování výskytu těchto biologicky aktivních látek, případně jejich metabolitů / degradačních produktů, je nutné disponovat vhodnými analytickými postupy, které umožní spolehlivou identifikaci a kvantifikaci cílových analytů i na stopových hladinách. Dizertační práce sestávající celkově z 8 kapitol prezentovaných na celkem 140 stranách formou textu, grafů a obrazové dokumentace, se zaměřila na v ČR hojně využívaná sulfonamidová antibiotika. Pro jejich stanovení v různých typech matric byla zvolena vysokoúčinná kapalinová chromatografie. Teoretická část je přehledně a vyváženě strukturovaná, komplexně jsou zde prezentovány aktuální informace o problematice kontaminace vodního ekosystému rezidui léčiv s akcentem na cílové sulfonamidy. Popsány jsou detailně i jejich fyzikálně-chemické vlastnosti a léčebné efekty. Velká pozornost je věnována strategii stanovení těchto léčiv ve složkách prostředí, široce jsou diskutovány jak nejvýznamnější technologie používané pro vzorkování, tak i metody aplikovatelné pro vlastní instrumentální stanovení. V Experimentální části je nejprve podrobně popsána selekce a optimalizace separační, izolační a předkoncentrační metody. Autorka kriticky zhodnotila široké portfolio extrakčních postupů využívajících různé fyzikální principy, včetně mikrovln, zvýšeného tlaku apod. V souladu se současnými trendy byla pro separaci cílových analytů v získaných extraktech zvolena HPLC s reverzní fází. Pro detekci analytů byl použit nejen UV resp. DAD detektor ale i tandemový hmotnostní spektrometr, tedy technika reflektující současné trendy v moderní reziduální analýze farmak. V rámci validace této techniky byly studovány i matriční efekty a kriticky hodnocena strategie kalibrace. V navazujících experimentech byl vyšetřen rozsáhlý soubor vzorků různých složek vodního ekosystému – povrchové vody, sedimentů a také ryb reprezentujících biotickou složku. Analyzovány byly též kaly z vybraných ČOV. Výsledky jsou v práci kriticky diskutovány a nejvýznamnější z nich byly publlikovány / předloženy k publikaci v zahraničních impaktovaných časopisech. Autorka též vystoupila s prezentací výsledků na různých odborných setkáních a symposiích. Celkové zhodnocení dizertační práce: V rámci dizertační práce byla vyvinuta nová originální metoda pro stanovení nejčastěji používaných sulfonamidových antibiotik, významné v ČR hojně používané skupiny léčiv. Aplikace nové metody po její validaci umožnila získání řady zajímavých poznatků o kontaminaci různých typů vod a je vhodná nejen pro rutinní monitoring ale i pro posuzování funkce čistíren odpadních vod. I přes některé drobné připomínky hodnotím dizertační práci, jak z hlediska odborného tak i pokud jde o úroveň prezentace, jako výbornou. Práce odráží nejenom vysokou odbornou úroveň doktorandky, ale i vysoce kvalitní vedení. Závěr Předložená dizertační práce paní Ing. Petry Dvořákové splňuje po stránce vědecké, obsahové a formální požadavky stanovené příslušnými vyhláškami pro získání vědecko-akademické hodnosti. Na základě uvedených fakt navrhuji, aby Ing. Petře Dvořákové po úspěšné obhajobě dizertační práce byla udělena vědecko-akademická hodnost Ph.D. ve studijním oboru 2805V003 Chemie životního prostředí.
Autorka se v předložené práci zabývala optimalizací metod stanovení vybraných antibiotik na bázi sulfonamidů ve vzorcích povrchových vod, v sedimentech a kalech a také v rybí svalovině. Velkou pozornost věnovala především problematice zpracování vzorků a izolace analytů z matrice. V případě kapalných vzorků testovala použití extrakce tuhou fází (SPE). U pevných vzorků pak zkoumala využitelnost tří extrakčních metod, a to zrychlenou extrakci rozpouštědlem za zvýšeného tlaku (PSE), mikrovlnnou extrakci (MAE) a extrakci ultrazvukem, z nichž jako nejlepší vyhodnotila metodu PSE. Při zpracování rybí svaloviny pak rovněž ověřovala použití metody PSE. K vlastnímu analytickému stanovení vybraných sulfonamidů zvolila kapalinovou chromatografii s využitím detektoru diodového pole a dále hmotnostního detektoru. Vypracované metody pak aplikovala na reálné vzorky. Předložená disertační práce obsahuje 140 stran. Je členěna do pěti hlavních kapitol. Dále obsahuje seznam použité literatury, seznam zkratek, přílohy a profil autorky včetně její publikační činnosti, která je na velmi dobré úrovni. V teoretické části práce se autorka podrobně věnuje dosud publikovaným literárním poznatkům, z nichž čerpá informace pro řešení studované problematiky. Důraz je zde kladen na výskyt antibiotik v životním prostředí, na charakteristiku vybraných sulfonamidů a na metody stanovení léčiv. Experimentální část práce je věnována představení metod, které autorka používala, či testovala. Výsledková část pak shrnuje poznatky vycházející z provedených experimentů a výsledky analýz reálných vzorků. Lze konstatovat, že obsah i forma práce celkově odpovídají požadavkům kladeným na dizertační práce. Přeložený text má přiměřený rozsah a obsahuje obvyklé náležitosti. Hodnocená práce svědčí o tom, že autorka ovládá teorii i metodiku studované problematiky a je schopena ji dále rozvíjet. Zároveň dovede srozumitelně a názorně své poznatky formulovat . Předložená práce Ing. Petry Dvořákové je přínosným příspěvkem v oblasti studia výskytu reziduí léčiv ve vodách a kalech, případně ve vodní fauně. Přináší původní poznatky. Autoka řadu dílčích výsledků publikovala v odborných časopisech a ve sbornících konferencí tuzemských i zahraničních. Vzhledem k výše uvedeným skutečnostem doporučuji disertační práci přijmout k obhajobě.
Predložená dizertačná práca Ing. Petry Dvořákovej predstavuje ucelený súborný vedecký spis s klasickým členením na úvod, teoretickú časť (34 strán), experimentálnu časť (10 strán), výsledky a diskusiu (53 strán) a záver. V časti Prílohy sú podrobne zdokumentované ukážky z experimentu, ako hmotnostné spektrá, grafy a tabuľky s výsledkami. Dizertačná práca z hľadiska analytického sa zaoberá vysoko zaujímavou a aktuálnou problematikou analýzy rezíduí vybraných liečiv (sulfónamidy) v odpadových a povrchových vodách s využitím najmodernejších analytických metód, ako je kvapalinová chromatografia s hmotnostno-spektrometrickou detekciou. V úvode autorka poukazuje na aktuálnosť zvolenej problematiky a konštatuje, že skupina antimikrobiálnych chemoterapeutík (silfónamidov) používaných v humánnej a predovšetkým vo veterinárnej medicíne sa stala vážnym problémom už aj pre ekosystém. A preto je potrebné, aby boli tieto látky sledované aj v životnom prostredí. V úvode autorka zároveň uvádza zameranie štúdie. Práca je zameraná na vývoj a optimalizáciu metódy stanovenia sulfónamidov v povrchových vodách riek Moravy a sedimentoch, kaloch a svalovine rýb metódou kvapalinovej chromatografie hmotnostnou detekciou. V teoretickej časti o liečivách dizertantka sa zmieňuje o antibiotikách, popisuje rozdelenie týchto látok, ich účinky a ich cyklus v životnom prostredí. V krátkosti popisuje jednotlivé sulfónamidy, ktoré sú ďalej predmetom práce. V analytickej časti tejto kapitoly uvádza teoretické poznatky extrakčných metód a kvapalinovej chromatografie (LC) s hmotnostne spektrometrickou detekciou (MS). Z prehľadu o metódach stanovenia vyplýva, že problematiku má dobre preštudovanú, čo vyplýva aj z počtu citovaných prác. Zvolené metódy a postupy spracovania uvedené v experimentálnej časti sú adekvátne zameraniu štúdie. Osobitná pozornosť je venovaná extrakčným metódam, ich optimalizácii a účinnosti. Podrobne sú popísané postupy a metódy od odberu vzorky až po samotnú analýzu. Táto časť je pekne doplnená obrázkami prístrojov a zariadení, schémami a tabuľkami. Výsledky dizertačnej práce a nové poznatky Kapitola výsledky a diskusia je rozdelená na vývoj metód, optimalizáciu podmienok LC, optimalizáciu extrakčných metód, kde boli použité štyri extrakčné metódy, SPE, PSE, MAE a USE metódy a časť, kde je spracovaná analýza reálnych vzoriek. Značná časť práce je venovaná predovšetkým výberu a optimalizácii a účinnosti extrakčných metód. Dizertantka rozsiahlym systematickým štúdiom získala cenné pôvodné poznatky v predmetnej oblasti, ktoré svedčia o správnosti výberu a perspektívach uvedených postupov. Práca prináša nové poznatky v oblasti stopovej analýzy sulfónamidov z rôznych matríc vodného ekosystému s využitím LC-MS. Obrázky, grafy a tabuľky sú spracované prehľadne a sú dobre skomentované. Metódy merania a spracovania výsledkov boli zvolené správne a štatisticky vyhodnotené. V závere sú zhodnotené dosiahnuté výsledky. Konštatujem, že stanovené ciele, ako sú popísané a komentované vo výsledkoch, boli všetky splnené. Dizertačná práca predstavuje vedecký a technický prínos v podobe nových poznatkov a aplikácie navrhnutých metód pre stanovenie rezíduí sulfónamidov v matriciach vodného ekosystému. Výsledky dizertácie dizertantka publikovala v impakt faktorových časopisoch 3x ako 1. autor a 1x ako spoluautor. Abstrakty a príspevky konferencií predstavujú 8 publikácií. Dizertačná práca Ing. Petry Dvořakovej prináša nové poznatky v oblasti kvapalinovej chromatografie s MS detekciou pri stanovení rezíduí sulfónamidov v povrchových vodách, sedimentoch a kaloch. Jednoznačne poukazuje na zvládnutie metodiky vedeckej práce a schopnosť samostatne tvorivo vedecky pracovať. Vyššie uvedené pripomienky k dizertačnej práci sú skôr formálneho charakteru a neznižujú jej pozitíva a dosiahnuté výsledky. Preto na základe uvedených skutočností doporučujem dizertačnú prácu Ing. Petry Dvořákovej k obhajobe a na základe úspešnej obhajoby udeliť akademický titul doktor, „philosophiae doctor“ v skratke „PhD“ v doktorandskom študijnom programe „Chemie a technologie ochrany životního prostředí“.
eVSKP id 59690