NĚMCOVÁ, A. Produkce vybraných kvasinkových metabolitů využitelných do potravinových doplňků [online]. Brno: Vysoké učení technické v Brně. Fakulta chemická. 2014.
Ing. Andrea Hároniková je v současné době studentkou 5.ročníku kombinované formy doktorského studijního programu „Chemie a technologie potravin“. Studium zahájila v roce 2011, v srpnu 2014 předložila ing. Hároniková disertační práci na téma „Produkce vybraných kvasinkových metabolitů využitelných do potravinových doplňků“. V rámci doktorského studia byly realizovány všechny experimenty, doktorandka splnila veškeré předepsané zkoušky a v roce 2013 úspěšně složila státní doktorskou zkoušku. V průběhu studia absolvovala ing. Hároniková zahraniční pobyt na Universitě v Lundu (Department of Biotechnology, Lund University, Sweden), kde pracovala pod vedením prof. Gunara Lidena na problematice blízké tématu disertační práce. Podílela se na řešení několika projektů i spolupráce s průmyslovou praxí, např. projektu Centra materiálového výzkumu“ CZ.1.05/2.1.00/01.0012/ERDF na FCH VUT v Brně s návazným projektem Národního programu udržitelnosti MŠMT. V rámci těchto projektů se zabývá biotechnologickou produkcí a analýzou kvasinkových metabolitů a rovněž specifickými instrumentálními technikami (Ramanova spektrometrie, molekulární metody, průtoková cytometrie, fluorescenční mikroskopie apod.). Byla řešitelkou a úspěšně obhájila dva projekty FRVŠ: projekt sekce G4/2011 na téma „Sledování průběhu biotechnologického procesu pomocí instrumentálních technik“ a sekce G4/2012 „Izolace, purifikace a charakterizace vybraných mikrobiálních enzymů“. V roce 2011 získala v rámci celoměstské soutěže rovněž prestižní tříletý projekt financovaný v rámci výzvy Brno PhD Talent (Regionální inovační strategie 3) s názvem „Biotechnologická produkcia karotenoidov a ergosterolu kvasinkami s využitím modifikovaných odpadových substrátov“. Doktorandka během studia absolvovala řadu odborných kurzů, jazykových kurzů a kurzy komunikačních dovedností. V současné době pracuje ing. Hároniková jako junior-výzkumný pracovník na CMV FCH VUT v Brně. V průběhu řešení disertační práce se ing. Hároniková podílela mimo jiné na výuce předmětů Praktikum z biochemie, Praktikum z instrumentální a strukturní analýzy a jako konzultant i na vedení bakalářských prací a prací SOČ. Dosažené výsledky byly prezentovány formou 5 publikací v mezinárodních časopisech s IF (jeden v recenzním řízení), 2 recenzovaných publikací, dále 8 příspěvků s plným uvedením textu ve sbornících a rovněž formou dalších 16 příspěvků na mezinárodních konferencích a konferencích s mezinárodní účastí konaných v ČR a SR. Je hlavní autorkou přihlášeného užitného vzoru „Příprava obohacené kvasinkové biomasy C.capitatum CCY 10-1-2 pro krmivářské účely“ (přihláška č. 2151/2014, VUT v Brně). Ing. Hároniková je komplexní flexibilní osobnost s výraznou schopností týmové práce, s řadou teoretických i praktických zkušeností v oblasti práce s mikroorganismy, fermentačních technologií a analýzy mikrobiálních metabolitů. Důležitý je i její pozitivní přístup k práci i k lidem, což je základem navázání řady úspěšných spoluprací s prestižními odbornými pracovišti (ÚPT Brno, VÚVEL Brno). Získané výsledky zadaného tématu byly shrnuty ve zdařilé disertační práci, která dokumentuje tvůrčí přístup k práci, odbornou úroveň a přehled ing. Háronikové ve studované tématice. Vzhledem k výše uvedeným skutečnostem a v souladu s platnou legislativou doporučuji, aby byla disertační práce přijata k obhajobě a po jejím úspěšném obhájení byla ing. A. Háronikové udělena vědecká hodnost Ph.D.
Předložená práce je zaměřena na produkci vybraných kvasinkových metabolitů, které jsou využitelné při přípravě a zpracování některých typů potravinových doplňků. Pro potřeby splnění cílů disertační práce musela autorka disertace zpracovat rozsáhlou literární rešerši, zaměřenou především na kvasinky a jejich růst, dále na jejich kultivaci a také na vliv stresového prostředí. Zvláštní pozornost je v práci věnovánakarotenogenním kvasinkám, kde je kromě jejich kompletní charakterizace popsán jejich růst, metabolismus a cytologické metody vhodné pro sledování kvasinek. Vyčerpávajícím způsobem jsou popsány také karotenoidy, zejména jejich fyzikálně chemické vlastnosti, chemická struktura, jejich funkce, biosyntéza a rovněž analýza karotenoidů a lipidických látek. Pro doplnění je literární rešerše rozšířena o biosyntézu lipidů a sterolů. V teoretické části práce je také posuzován efekt nutričního a fyziologického stresu, který může značnou měrou ovlivňovat produkci biomasy a karotenoidů červených krvinek a dále možnosti molekulárních charakteristik kvasinek, zaměřené především na PCR ve spojení s denaturační gradientovou elektroforézou (DGGE) a na pulzní elektroforézu (PFGE). Pro potřeby splnění cílů disertační práce musela autorka disertace zvládnout celou řadou postupů a metod, z nichž lze jmenovat zejména postupy kultivace karotenogenních kmenů, dále stanovení sacharidů v kultivačních médiích a v hydrolyzovaných odpadních materiálech, při kterémsi ověřovala vhodnost několika postupů, mikroskopickou techniku aplikovanou na pozorování morfologických změn a klasické metody pro stanovení dusíku Kjeldahlovou metodou a stanovení růstových charakteristik. Při práci dále využívala i několik složitějších laboratorních technik, na jejichž precizním provedení v podstatě záviselo splnění cílů disertační práce. Jednalo se zejména o izolaci kvasinkové DNA, PCR, denaturační gradientovou gelovou elektroforézu a pulzní gelovou elektroforézu. Pro sepsání teoretické části a kompletní seznámení s řešenou problematikou prostudovala a zpracovala celkem 114 literárních pramenů, které ji dostatečným způsobem uvedly do problematiky a umožnily ji sepsat vysoce kvalitní disertační práci. Práce je sepsána klasickým způsobem na celkem 140 stranách textu, včetně příloh. Po stylistické stránce je výborně sepsána, s minimem překlepů.Celý text disertační práce, tj. teoretická i experimentální část, jsou vhodným způsobem doplněny vysvětlujícími tabulkami a grafy, případně chemickými vzorci, schématy a obrázky. Použitá literatura je citována v souladu s normou. Práce dále obsahuje seznam použitých zkratek a také přílohu, kde je prezentován odborný životopis autorky disertace. Z tohoto životopisu jednoznačně vyplývá, že Ing. Háronikovájiž v průběhu svého doktorského studia pracovala velmi systematicky, jako řešitel a spoluřešitel zpracovala dva projekty FRVŠ a jeden projekt garantovaný Jihomoravským centrem pro mezinárodní mobilitu. V současné době řeší odborné studie v rámci Centra materiálového výzkumu na FCH VUT v Brně, kde je členem řešitelského týmu. Jako řešitelka nebo spoluřešitelka publikovala již 5 příspěvků do časopisů s IF a dvě publikace do recenzovaného časopisu. Kromě toho prezentovala výsledky své práce na mnoha zahraničních konferencích, případně na konferencích s mezinárodní účastí, a to buď jako hlavní autor, nebo jako spoluautor. Výsledky a diskuse jsou zpracovány do několika na sebe navazujících kapitol, které autorce předložené disertační práce umožnily splnit vytčené cíle. V průběhu řešení bylo zpracováno značné množství dílčích experimentů a bylo dosaženo několika významných výsledků, z nichž lze jmenovat například optimalizaci podmínek kultivace, kde byly posuzovány efekty mnoha faktorů, zejména koncentrace nutričních zdrojů, teploty, světla a chemickéhostresu. Dále byly pomocí růstových charakteristik a morfologických znaků hodnoceny změny produkce biomasy a změny probíhající v buňkách kvasinek. Jako potenciální zdroje uhlíku a dusíku byly testovány různé agroprůmyslové odpadní materiály, z nichž některé byly podrobeny enzymové hydrolýze a následně u nich bylo pomocí spektrofotometrických a separačních metod hodnoceno množství uvolněných monosacharidů.Komplexní metabolické změny byly posuzovány prostřednictvím polymerázové řetězové reakce, denaturační gradientové gelové elektroforézy a pulzní gelové elektroforézy. Za účelem zjištění karyotopůkarotenogenních kvasinek byla rovněž optimalizována izolace intaktní chromozomální DNA. V průběhu řešení své disertační práce se Ing. Hároniková seznámila s dalšími technikami, a to Ramanovou spektrometrií a fluorescenční mikroskopií. Tyto postupy ji umožnily provádět rychlou detekci významných lipidů a metabolitů ještě v průběhu kultivace karotenogenních kvasinek. Závěry předložené disertační práce byly shrnuty celkem do deseti subkapitol. Přínosem je také to, že aplikované výstupy jsou výhodné z ekologického a ekonomického hlediska, protože podstatně sníží zatížení životního prostředí odpady. Obohacená kvasinková biomasa může být využita v krmivářském průmyslu, provitamíny a vitamínyve farmaceutickém a potravinářském průmyslu. V práci je uváděn obsah lipidů, karotenoidů a ostatních parametrů bez směrodatných odchylek. Proč nebyla tato základní metrologická charakteristika v práci uvedena? Jinak nemám k charakteru práce ani k získaným hodnotným výsledkům žádné připomínky, naopak jsem toho názoru, že vznikla vysoce kvalitní a ucelená studie, která posune příslušný vědní obor dopředu. Rovněž mohu konstatovat, že práce vysoce překračuje požadavky kladené na disertační práce zpracovávané na FCH VUT v Brně. Po pečlivém a důkladném prostudování této obsáhlé práce mohu konstatovat, že předložená disertační práce splňuje veškerá kritéria stanovená na VUT v Brně a proto doporučuji, aby byla Ing. Andrei Háronikové, a to po úspěšné obhajobě, udělena hodnost Ph.D.
eVSKP id 80106