LÍZALOVÁ, M. Aplikace vybraných metod k analýze oxidačního stresu [online]. Brno: Vysoké učení technické v Brně. Fakulta chemická. 2010.
Ing. Martina Lízalová po celou dobu studia řádně plnila svoje studijní i výukové povinnosti. Experimentální část své disertační práce realizovala v laboratořích Oddělení patofyziologie volných radikálů Biofyzikálního ústavu AV ČR, v.v.i. v Brně v rámci projektu Interní grantové agentury MZ ČR zaměřeného na rozvoj chronického zánětu a oxidačního stresu u pacientů s chronickou pankreatitidou. Přínos doktorandky k úspěšnému řešení projektu je mimořádný. Zajišťovala okamžité laboratorní zpracování vzorků krve odebíraných ve Fakultní nemocnici Bohunice a jejich bezpečný transport do BFÚ AV ČR. Zde následně vzorky podrobila specializovaným analýzám, ve kterých sledovala přítomnost produktů lipidové peroxidace, ukazatele chronického, oxidačního stresu a další hematologické a biochemické parametry. K těmto analýzám doktorandka zavedla a zdokonalila řadu specializovaných metod. Všechny tyto činnosti doktorandka pečlivě zvládla a získala řadu výsledků, které zásadní měrou přispěly k úspěšnému řešení projektu. Výsledky byly průběžně zpracovávány, prezentovány na vědeckých konferencích a publikovány ve vědeckých časopisech (2x první autor ve článcích zveřejněných v časopisech s impakt faktorem, 2x člen autorského kolektivu) a následně shrnuty v disertační práci. Lze tedy konstatovat, že Ing. Lízalová splnila všechny požadavky kladené na doktorské studium. Práci proto doporučuji k obhajobě a dále po úspěšném průběhu obhajoby doporučuji, aby Ing. Martině Lízalové byl udělen akademický titul PhD.
Předložená disertační práce má rozsah 107 stran a přílohy. Text je obohacen řadou schémat, obrázků, grafů a tabulek. Práce je členěná obvyklým způsobem do jednotlivých kapitol. Přílohy zahrnují tři uveřejněné publikace a jeden rukopis připravovaný k publikování. Součástí příloh je rovněž curriculum vitae. Experimentální část práce byla řešena na Biofyzikálním ústavu Akademie věd ČR, a to s podporou dvou grantů (Grantová agentura AV ČR a interní grantová agentura Ministerstva zdravotnictví ČR). Hodnocení práce Práce je zaměřena na provedení několika dílčích cílů a společným výsledkem je studium markerů oxidačního stresu u pacientů s chronickou pankreatitidou. Práce zahrnuje jednak optimalizaci metod, vyšetření skupiny pacientů a kontrolní skupiny zdravých jedinců a dále také získání a vyhodnocení dalších informací, které jsou relevantní ke vzniku nebo příjmu volných radikálů. Kapitoly Úvod a Cíle práce jsou dobře formulovány a objasňují smysl práce a dílčí úkoly nutné pro zajištění výsledků. Teoretická část práce obsahuje výsledky studia odborné literatury a sleduje tématiku práce z hlediska charakteristiky volných radikálů a oxidačního stresu ve vztahu ke sledovanému onemocnění a dále je pozornost věnována metodám pro analýzu oxidačního stresu. Experimentální část práce popisuje použité chemikálie a přístroje, metody, postupy, včetně výběru pacientů. Použité metody zahrnovaly kapalinovou chromatografii s DAD detektorem (pro stanovení produktů lipidové peroxidace, tj. malondialdehydu a 4-hydroxynonenalu), metody TRAP a ORAC (pro zjištění antioxidační kapacity plazmy), spektrofotometrickou metodu (pro stanovení obsahu dusitanů) a ELISA metodu (stanovení některých protilátek). Výsledková část tvoří podstatnou část práce. Cenným aspektem práce je velké množství dat získaných v pěti sériích odběrů vždy po šesti měsících. Laboratorní výsledky nemocných pacientů byly doplněny o hodnocení rizikových faktorů a také vyhodnocení v čase. Pro porovnání sloužily výsledky získané vyšetřením ve skupině zdravých jedinců. Pro prezentování výsledků jsou použity vhodné grafické prostředky. Experimentální část poskytla dostatečné podklady pro vyhodnocení a diskusi. Závěr práce obsahuje shrnutí výsledků a naznačuje význam výsledků pro praktické využití a další nasměrování práce v dané oblasti. Kapitola Literatura zahrnuje 140 citací, asi třetina literárních zdrojů je z posledních 5 roků. Seznam literatury je v souladu s obsahovou náplní práce a v zásadě byly dodrženy požadavky ČSN ISO 690 Bibliografické citace. Závěr Téma práce je zajímavé a je pečlivě zpracované. Práce splnila stanovené cíle a přispěla k dalšímu rozvoji poznání v oblasti oxidačního stresu, volných radikálů a jejich úloze ve vzniku a rozvoji některých onemocnění. Celá práce svědčí jak o dobré teoretické přípravě dizertantky tak i o schopnosti vhodnými metodami stanovené cíle naplnit. Předložená práce splňuje po stránce vědecké, obsahové i formální kritéria, která jsou požadována pro disertační řízení a prokazuje teoretickou a odbornou úroveň dizertantky. Proto ji v souladu s platnými předpisy doporučuji k obhajobě
Předložená doktorská disertační práce na téma: Aplikace vybraných metod k analýze oxidačního stresu představuje nesporně cenné souborné dílo. Práce v rozsahu 108 stran je rozdělena do 9 kapitol. Úvodní kapitola stručně, ale jasně charakterizuje řešenou problematiku. Cíle jsou konkrétní a v šesti bodech jednoznačně formulované. Rozsáhlá teoretická část se věnuje popisu současného stavu poznatků o volných radikálech, reaktivních formách kyslíku a dusíku v organismu, ale i o exogenních faktorech, které výrazně zvyšují produkci volných radikálů. V teoretické části se autorka dále věnuje oxidativnímu stresu, antioxidační ochraně organismu a roli oxidativního stresu při vzniku chronické pankreatitidy. V závěru teoretické části popisuje metody použité k analýze oxidačního stresu u pacientů s chronickou pankreatitidou. V experimentální části jsou velmi přehledně popsány použité metody vlastních analýz a odběrů vzorků krve u sledovaných pacientů. Výsledky analýz jsou v podobě kvalitně zpracovaných grafických výstupů, znázorňujících v různých časových intervalech plazmatické hladiny markerů oxidačního stresu a zánětlivého procesu u pacientů s chronickou pankreatitidou v porovnání se zdravými jedinci. Všechna zjištěna data jsou staticky vyhodnocena. V závěru experimentální části autorka prokázala schopnost interpretačního zhodnocení dosažených výsledků, které i vhodně konfrontovala s dostupnými literárními údaji. Ze závěru disertační práce vyplývá, že její cíle byly splněny, výsledky práce jsou významným přínosem při hledání účinných postupů v charakterizaci závažnosti a rozvoje chronické pankreatitidy a její efektivní léčby. Práci doplňuje seznam použité literatury obsahující 140 relevantních a správně citovaných literárních zdrojů a seznam použitých zkratek. Poslední kapitolu tvoří tři vědecké publikace prezentované v renomovaných a tedy i recenzovaných vědeckých časopisech a jeden manuskript obsahující výsledky mezilaboratorního porovnání metod stanovení lipidní peroxidace. K nesporným přednostem disertační práce patří její komplexní pojetí s vyváženým poměrem diskutovaných literárních informací a vlastních vědeckých výsledků, jakož i moderní podání práce po stránce obsahové i grafické. Problémový i metodický záběr je široký a dotýká se teoretických, ale i praktických aspektů celé řady biologických, chemických, ale i medicínských oborů. Popisy experimentů i jiné relevantní informace a to jak z literatury a jejich zhodnocení, tak z vlastní experimentální činnosti jsou jasné, pro čtenáře srozumitelné a nevyvolávají tak žádné pochybnosti ani potřebu závažných dodatečných otázek. K práci nemám žádné připomínky, které by snižovaly vysokou odbornou úroveň práce. Závěrem konstatuji, že řešené téma je velmi aktuální, přináší poznatky o vhodných metodách analýzy a markerech oxidačního stresu u pacientů s chronickou pankreatitidou, což je významné jak z pohledu rozvoje vědy, tak i z hlediska medicínské praxe. Předložená disertační práce splňuje požadavky kladené na disertační práce § 47, ods. 4 zákona č. 111/1998 Sb. O vysokých školách. Autorka přesvědčivým způsobem prokázala své tvůrčí schopnosti. Na základě tohoto hodnocení doporučuji přijetí předložené práce k obhajobě a po jejím úspěšném vykonání - udělení Ing. Martině Lízalové akademicko - vědecký titul "Doktor" (Ph.D.).
Předložená disertační práce je zpracována celkem na 108 stranách textu; sepsána je velmi pěknou češtinou, s minimem překlepů a je rozdělena celkem do 9 kapitol. Celý text je vhodným způsobem doplněn tabulkami, rovnicemi, grafy, schematy a obrázky, které umožňují lepší pochopení prezentovaného textu. Práce obsahuje celkem pět příloh, z nichž tři představují již vydané publikace (na dvou z nich je předkladatelka disertační práce prvním autorem), čtvrtá je tvořena již připraveným manuskriptem řešeného projektu, na jehož řešení se jmenovaná podílela; poslední přílohu tvoří curicullum vitae autorky disertační práce. Celá experimentální práce byla řešena na Biofyzikálním ústavu Akademie věd ČR, kde autorka disertace působí, a to za podpory dvou grantů; první grant byl financován Grantovou agenturou AV ČR a druhý interní grantovou agenturou Ministerstva zdravotnictví ČR. První kapitola Úvod představuje řešenou problematiku, kterou se autorka práce zabývala; na tuto kapitolu navazuje další, ve které jsou jednoznačně specifikovány cíle předložené disertační práce, kterými je studium markerů oxidačního stresu u pacientů s chronickou pankreatidou. Dílčích úkolů potřebných ke splnění cílů je specifikováno celkem šest a byly koncipovány tak, aby umožnily komplexní splnění cílů. Kromě aplikace potřebných analytických a imunochemických metod musela předkladatelka disertační práce zvládnout i vlastní problematiku klinické biochemie a hematologie související s příslušným onemocněním. Za přínosné pro studijní obor, v rámci kterého byla práce řešena, považuji zpracování dotazníkové akce na téma potenciálního vlivu environmentální zátěže na parametry oxidačního stresu. Kapitola Teoretický úvod objasňuje dva základní problematiku řešené disertační práce, tj. volné radikály a oxidativní stres s nimi související. Podkapitoly obou hlavních kapitol teoretického úvodu jsou koncipovány tak, aby studentce poskytly dostatek podkladů pro vlastní experimentální činnost. Experimentální část je značně rozsáhlá, poskytuje potřebné údaje a jsou v ní podrobně popsány prováděné veškeré postupy, včetně výběru souboru pacientů. Pro stanovení produktů lipidové peroxidace, tj. malondialdehydu a 4-hydroxynonenalu byla zvolena kapalinová chromatografie s DAD detektorem, antioxidační kapacita plazmy byla zjišťována dvěma způsoby, metodou TRAP a ORAC. Oba dva postupy použité pro toto stanovení byly spolu porovnány a lepší z nich potom sloužil pro analýzu vybraných biochemických a hematologických pacientů. Kromě těchto postupů byl sledován také obsah dusitanů. Pro některa stanovení bylo využito imunochemické metody ELISA. Z výsledků je zřejmé, že byly vyšetřeny značné soubory pacientů, což při počtu sledovaných ukazatelů antioxidační aktivity bylo jistě časově náročné. Pro prezentaci výsledků byla použita grafická forma, což považuji za velmi přehledné a umožňující dobrou orientaci. Celkem bylo takto zhodnoceno všech 5 odběrů. Součástí prezentace výsledků je rovněž porovnání jednotlivých markerů v delším časovém horizontu. Veškeré výsledky byly vhodným způsobem diskutovány a přispěly zcela jistě k objasnění určitých hodnot u chronicky nemocných pacientů. Práce představuje soubor výsledků, výborně zhodnocených a sloužících ke shrnutí výsledků. Přehledné a výborně vypovídající jsou rovněž tabulky charakterizující pacienty, dále hodnotící etiologii a genetiku onemocnění aj. Z tabulky 12 je zřejmé, že velké množství vyšetřených pacientů umožnilo autorce disertace stanovit rizikové faktory, komorbidity a úroveň protilátek u pacientů s chronickou pankreatidou. Ukazatelé stanovené pro nemocné pacienty byly porovnány s kontrolním souborem obsahujícím zdravé jedince; rovněž byl provedeno posouzení vývoje hodnot pacientů v čase. Vzhledem k tomu, že publikace byly již převážně recenzované, nevyskytly se v práci žádné nejasnosti, které by bylo nutné ještě objasnit. Přesto bych položila několik dotazů, které by měla uchazečka o hodnost PhD. při své obhajobě zodpovědět. Závěrem mohu konstatovat, že předložená disertační práce je zpracována na velmi dobré odborné úrovni, je vyvážená z hlediska poměru teoretické a praktické části. Vyplývá to pravděpodobně z toho, že autorka pro pochopení řešené problematiky prostudovala celkem 140 položek citované literatury. Poznatky získané studiem této literatury umožnily dobře zpracovat teoretickou i experimentální část. Proto mohu konstatovat, že ing. Martina Lízalová předloženou disertační prací prokázala schopnost samostatné odborné práce v oblasti vědy a výzkumu a vyhovuje tak požadavkům §47, odst. 4 zákona č.111/1998 Sb. O vysokých školách. A na základě toho doporučuji práci přijmout k obhajobě a po její úspěšném průběhu ji udělit hodnost PhD
eVSKP id 28533