TRÖDLEROVÁ, M. Testování primerů pro ověření autenticity skořice [online]. Brno: Vysoké učení technické v Brně. Fakulta chemická. 2025.
Diplomová práce Martiny Trödlerové je zaměřena na testování vhodnosti nově navržených primerů specifických pro terpen-syntázu pro rozlišování různých druhů skořicovníků. Studentka v předložené práci analyzovala jak DNA izolovanou z jednotlivých druhů skořicovníků, tak i DNA izolovanou z jejích směsí. Studentce nelze nic vytknout ohledně celkového přístupu k řešení práce – při provádění experimentů projevila zručnost, samostatnost a vynalézavost, a výsledky průběžně konzultovala. Kompletní diplomovou práci také odeslala ke kontrole v dostatečném časovém předstihu před termínem odevzdání. Při psaní práce studentka dodržela všechny formální náležitosti. Výsledky jsou prezentovány ve formě přehledných tabulek a grafů, a jsou vhodně okomentovány, i když závěr práce, zejména jeho část rozebírající možné úpravy podmínek analýzy za účelem dosažení jednoznačnějších výsledků, mohl být sepsán podrobněji. Cíle práce byly splněny v celé šíři. Při kontrole přímo na webu Theses.cz byla zjištěna míra podobnosti s ostatními dokumenty 17 %, text tedy lze považovat za originální. Při vygenerování pdf verze srovnání sice vychází míra podobnosti až 96 %, ta je ale způsobena tím, že studentka nejprve odevzdala chybnou verzi souboru, která byla později nahrazena verzí správnou. Chybnou verzi práce bylo možné odstranit ze systému Apollo, ale v systému Theses.cz zůstala a po vygenerování pdf verze srovnání působí problémy. Práci doporučuji k obhajobě a hodnotím známkou A.
| Kritérium | Známka | Body | Slovní hodnocení |
|---|---|---|---|
| Splnění požadavků zadání | A | ||
| Kvalita zpracování výsledků | A | ||
| Celkový přístup k řešení úkolů | A | ||
| Využívání konzultací při řešení práce | A | ||
| Studium literatury a její zpracování | A | ||
| Interpretace výsledků, jejich diskuse | B | ||
| Využití poznatků z literatury | A | ||
| Závěry práce a jejich formulace | B |
V předložené diplomové práci se Bc. Martina Trödlerová zabývala důležitou a aktuální problematikou falšování potravin, konkrétně testováním primerů pro autentifikaci pravosti skořice pomocí molekulárně-biologických metod. Autorka cíleně využila specifickou real-time PCR s HRM analýzou k odlišení pravého druhu skořice (C. verum) od dalších běžně používaných druhů, jako jsou C. japonicum, C. camphora nebo C. tamala. Práce je sepsána na 87 stranách včetně příloh. Bylo využito celkem 57 literárních zdrojů, převážně zahraniční separátní literatury. Teoretická část je systematicky a přehledně zpracovaná, čtenáři poskytuje solidní přehled o taxonomii, chemickém složení a problematice falšování skořice, dále o použitých analytických metodách v experimentální části práce. Ocenila bych však zařazení kapitoly věnované přehledu současných praktických přístupů k sledování falšování skořice pomocí molekulárních technik (např. které genové úseky DNA se v praxi běžně využívají ke stanovení, jaké primery, apod). V experimentální části práce autorka navrhla a ověřila funkčnost několik párů primerů, z nichž některé prokázali schopnost specifické amplifikace DNA a odlišení jednotlivých druhů skořice na základě tvarů a průběhu křivek tání. Byly připraveny modelové směsi s různým podílem nepravých druhů skořice (5-40%), z nichž byla izolována rostlinná DNA dvěma izolačními postupy a následně analyzována. Výsledky jsou přehledně prezentovány formou početných grafů a tabulek včetně výpočtu skóre podobnosti. Podařilo se identifikovat rozdíly mezi pravou skořicí a dalšími druhy. Za důležité považuji zjištění, že některé modelové směsi vykazovaly vysokou míru podobnosti s pravou skořicí i v případě přídavků jiných druhů. To poukazuje na praktické limity této metody při detekci nízkých koncentrací falšování. Autorka však tento fakt správně interpretuje a hodnotí v kontextu analytické citlivosti a vhodnosti použitých primerů. Závěrečná část práce je věcná, možná by si zasloužila hlubší analýzu možností využití dané metody v praxi. Přesto lze říci, že předložená práce představuje vypracovanou časově náročnou studii s jasně definovanými cíli, které byli v plném rozsahu splněny. Diplomová práce Bc. Martiny Trödlerové má jednoznačný praktický přínos pro oblast kontroly falšování potravin. Výsledky mohou být využity jako metodický základ pro další vývoj možných molekulárních nástrojů zaměřených na detekci falšování, zejména v oblasti koření. Vzhledem k uvedeným skutečnostem doporučuji práci k obhajobě a hodnotím stupněm A. Poznámky k některým částem práce: Na str. 31-32 kapitola Stanovení koncentrace a čistoty DNA: V tabulce se nachází záporné hodnoty u poměru absorbancí 260/230. Uvedené vysvětlení autorky, že důvodem mohou být nečistoty na čočce je sice možné, ale nepůsobí dostatečně přesvědčivě. Tento jev by si zasloužil opakování měření po vyčištění čočky případně kyvety okamžitě po zjištění takových hodnot, případně zvážení využití alternativních metod stanovení koncentrace DNA. Str. 42 komentář ohledně diference normalizovaných křivek tání v grafu 14. Autorka uvádí: "zajímavé je, že pozitivní kontrola a CV jsou v tomto zobrazení mírně odlišné, přesto že se jedná o jeden a ten samý druh." Tato odlišnost opravdu může nastat a může být způsobená například genetickou variabilitou v rámci druhu (je to z 1 rostliny nebo z víc rostlin), případně kvalitou izolované DNA nebo technickými faktory během PCR, apod. Tento jev by si však zasloužil v práci podrobnější vysvětlení, než jen stručné konstatování, aby byla zachována důvěryhodnost dosažených výsledků.
| Kritérium | Známka | Body | Slovní hodnocení |
|---|---|---|---|
| Splnění požadavků zadání | A | ||
| Logické členění práce | A | ||
| Kvalita zpracování výsledků | A | ||
| Interpretace výsledků, jejich diskuse | B | ||
| Využití literatury a její citace | B | ||
| Úroveň jazykového zpracování | A | ||
| Formální úroveň práce – celkový dojem | A | ||
| Závěry práce a jejich formulace | B |
eVSKP id 161909