STRNADOVÁ, M. Strukturální studie extracelulárních domén adheze G protein-spojeného receptoru ADGRG4 [online]. Brno: Vysoké učení technické v Brně. Fakulta chemická. 2023.

Posudek vedoucího

Mravec, Filip

Diplomantka Bc. Martina Strnadová zpracovala diplomovou práci na téma strukturální studie extracelulárních domén adheze G protein-spojeného receptoru ADGRG4. Tato práce byla převážně zpracovávána na Univesität Liepzig (DE) v rámci programu Erasmus+. Práce zahrnovala exprimaci, purifikaci a charakterizaci proteinové struktury, kdy byly použity techniky Native PAGE, dynamickýc rozptyl světla, Western blotting a nanodiferenciační skenovací fluorescence. Vzhledem k získaným výsledkům tato práce položila důležitý základ pro následný výzkum těchto receptorů. S prací a přístupem studentky jsem spokojen, práci doporučuji k obhajobě a navrhuju hodnocení stupněm výborně/A.

Posudek oponenta

Márová, Ivana

Diplomová práce je zaměřena na strukturní studii extracelulárních domén adhezního G-proteinu spojeného s receptorem ADGRG4. Práce byla řešena v rámci programu Erasmus na University Leipzig. Rámcové cíle práce byly splněny. Práce je sepsána v angličtině, kultivovaným způsobem a s minimem chyb a překlepů. Rozsah práce je celkem 86 stran, z toho 76 stran textu a 4 přílohy. Práce je doplněna seznamem 67 citací vesměs aktuální separátní literatury. Citace jsou řazeny podle pořadí uvedení v textu a odpovídají příslušné normě. Práce má klasické členění, teoretická část má 15 stran, experimentální část bez literatury a příloh má 45 stran, důraz je tedy kladen na prezentaci výsledků. Předložená diplomová práce byla nadstardně náročná jak teoreticky, tak i s ohledem na množství různých technických a praktických dovedností, navíc řešená v zahraničním týmu. Teoretická část je zaměřena na stručný, výstižný a velmi komplexní popis buněčné signalizace a zapojení G-proteinů, dále na molekulární detaily a rozdělení G-proteinů. Podrobněji byly popsány adhezivní G-proteiny a receptory, které s nimi pracují. Formální úpravě lze vytknout snad jen příliš velké části stran bez textu, určitě bylo možné řadit obrázky a doprovodný text tak, ay byly využity pokud možno celé stránky. Experimentální část zahrnuje podrobný popis použitých metod včetně jejich principů, což je sice pro čtenáře pohodlné, ale některé části by patřily spíše do rešerše. Nicméně studentka musela v průběhu práce zvládnout řadu mimořádně náročných a přesných experimentálních technik používaných v rámci molekulového klonování. Součástí práce je příprava mutantního proteinu v atypickém "in-house" vektoru a příprava řady různých dalších konstruktů od N-terminálního konce, což vyžadovalo zvládnutí izolačních a purifikačních technik DNA i proteinů, amplifikaci sekvencí pomocí PCR, následnou transformaci humánních HEK293 buněk a expresi rekombinantních proteinů, Proteiny byly charakterizovány pomocí chromatografických a elektromigračních metod a pomocí DLS. Finální částí práce byla krystalizace purifikovaného a deglykosylovaného proteinu za účelem stanovení 3D struktury. ZVládnout uvedené množství metod a pomocí nich řešit složitý experimentální problém vyžadovalo mimořádnou houževnatost, schopnost zvládnout náročnou organizaci práce, disponovat laboratorními dovednostmi na velmi vysoké úrovni. V neposlední řadě byly experimenty jistě velmi časově náročné a práce v zahraničním kolektivu vyžadovala rovněž specifický přístup, dostatečné jazykové znalosti, flexibilitu a odvahu. Výsledkem mimořádné aktivity studentky je zdařilá diplomová práce, která je východiskem pro další experimenty. Významný podíl studentky na dosažených výsledcích je z práce jasně patrný. Vzhledem k výše uvedeným skutečnostem doporučuji práci k obhajobě a hodnotím ji výslednou známkou A (výborně).

eVSKP id 148137