MIKULÍKOVÁ, Z. Charakterizace kolagenu izolovaného z různých živočišných tkání [online]. Brno: Vysoké učení technické v Brně. Fakulta chemická. 2010.

Posudek vedoucího

Márová, Ivana

Studentka přistupovala k řešení všech dílčích úkolů diplomové práce samostatně, iniciativně a zodpovědně. V rámci experimentálně velmi obtížné práce zvládla řadu technik práce s nerozpustnými proteiny kolagenového typu od izolačních postupů přes spektrofotometrické metody až po elektromigrační techniky a mikročipovou elektroforézu. Součástí práce byla i organizačně náročná srovnávací studie mikrobiální a fyziologické stability izolovaných kolagenů. Celkově studentka prokázala schopnost samostatného řešení experimentálních problémů včetně kritického hodnocení výsledků a interpretace dat. Projevovala rovněž značnou laboratorní zručnost a schopnost organizace práce v laboratoří. Výsledky a optimalizované metody získané v průběhu řešení diplomové práce jsou přínosným výstupem v rámci projektu MSM 0021630501, z něhož byla práce podpořena. Výsledky byly nebo jsou přijaty k prezentaci jako součást několika sdělení na mezinárodních i národních konferencích a představují potenciální aplikační výstup. Vzhledem k výše uvedeným skutečnostem hodnotím celkovou aktivitu diplomantky stupněm výborně (A) a práci doporučuji k obhajobě.

Posudek oponenta

Drábková, Michaela

Diplomová práce má 108 stran, 44 tabulek, 54 obrázků zahrnujících také grafy a 1 přílohu. Autorka si pro svoji práci vybrala studium a charakterizaci kolagenu, bílkoviny důležité nejen z hlediska biomedicínského výzkumu a použití. V této práci byla popsána optimalizace izolačního postupu kolagenu z různých živočišných tkání a optimalizace metod molekulární charakterizace kolagenových izolátů. Předmětem práce bylo také studium vlivu fyziologie organismu na vlastnosti izolátu (věk, výživa) a studium stability vyizolovaného kolagenu v modelovém prostředí. V teoretické části práce byla popsána jednak struktura a vlastnosti kolagenu, jeho význam jako biomateriálu četně používaného v mnoha průmyslových odvětvích, ale také teorie izolačních a separačních medod použitých při vypracování této práce. Praktické provedení jednotlivých pokusů bylo popsáno v experimentální části. Práce byla zpracována na dobré úrovni. V celé práci by bylo dobré zachovávat jednotný styl (např. byl/jsou, str. 102). Výsledky byly zpracovány přehledně, i když kvůli lepší orientaci v textu by sled kapitol v experimentální části mohl odpovídat členění v teoretické části (např. posloupnost tepelné a fyziologické stabilita v teoretické části (str. 55) a fyziologické stability (str. 84) uvedené před tepelnou stabilitou (str. 89) v experimentální části práce). K pokusům z viskozimetrického meření a ICP v experimentální části práce není zahrnuta ani stručná teorie. Tabulku z přílohy č. 1 by bylo lepší umístit do experimentální části, protože příloha obsahuje také část komentáře k získaným výsledkům. Některým odkazům v textu chybí skutečný odkaz na literaturu (viz. "odkaz teorie" str. 101). V tabulkách komentujících jednotlivé analýzy není uvedena koncentrace nanesených vzorků, v textu komentujícím výsledky by bylo dobré uvést také velikosti (molekulové hmotnosti) jednostlivých získaných kolagenů. Na obrázcích s kultivovanými bakteriemi pro analýzu stability kolagenu chybí přehledný popis jednotlivých misek (str. 92-94). Na straně 96 je uvedeno nesprávné označení čísla tabulky - tab. 40 - neobsahuje požadované výsledky. V seznam použitých zkratek nejsou uvedeny všechny v textu použité zkratky (např. NL (tab. 44), Mr ..). Otázky: 1) Pro stanovení fyzilogické stability kolagenu byla měřena absorbance vzorků získaných meto-dou TNBSA (str. 86). Ve výsledcích je uvedené, že hodnoty výsledků mohou být zkresleny pří-tomností enzymového preparátu. Byla při pokusu provedena korekce výsledků o absorbanci enzymového preparátu? 2) Proč byl srovnávací pokus analýzy izolovaných bílkovin pomocí barvení stříbrem proveden u rozdílných podmínek než analýza při PAGE-SDS? 3) Jaký typ gelu a jaká koncentrace gelu byla připravena pro separace s použitím Mini Protean Tetra Cell (str. 78)? 4) Co bylo určujícím faktorem pro výběr právě lidské patogenní bakterie Pseudomonas aeruginosa a Escherichia coli pro určení mikrobiální stability kolagenu? Co způsobilo zpřístup-nění šroubovice kolagenu v prostředí bez kultury při provedených experimentech (str. 96)? 5) Jako jeden z výsledků charakterizace kolagenu je komentovaná analýza kolagenu izolovaného ze staré slepice a to ve vztahu k vyšší teplotě, působení enzymových preparátů či obsahu lysinu. Je možné získané výsledky stručně a přehledně shrnout?

eVSKP id 24730