ŠIMKOVÁ, E. Optimalizace metod izolace a analýzy beta-glukanů produkovaných karotenogenními kvasinkami [online]. Brno: Vysoké učení technické v Brně. Fakulta chemická. 2023.

Posudek vedoucího

Szotkowski, Martin

Předložená diplomová práce studentky Evy Šimkové se zabývá produkcí a primárně metodami extrakce a stanovení -glukanů v biomase karotenogenních kvasinek. -glukany jsou známy svou vysokou imunostimulační aktivitou u lidí a zvířat. Nachází tak potenciální uplatnění v potravinářství, farmacii či krmivářství. Experimentální práce byla rozdělena do několika celků. V první části práce studentka nakultivovala dostatečné množství biomasy pro následující testy. Následně byla provedena série extrakčních postupů zaměřených na optimalizaci extrakce a zisk čistého -glukanového izolátu. V rámci práce studentka dále pracovala na optimalizaci komerčního enzymatického kitu, který sloužil pro kontrolní stanovení -glukanů ve vzorku. Všechny zadané úkoly a cíle studentka splnila daleko nad rámec stanovený v cílech diplomové práce. V průběhu práce studentka projevovala vysokou míru samostatnosti, proaktivní přístup i ochotu pomoci dalším kolegům v laboratoři. Rád bych zde vyzdvihnul rozsáhle množství analýz, které studentka v rámci této práce zvládla. Dále počet časově velmi náročných stanovení a extrakcí (jednotky dnů) a řadu postupů a kombinovaných metod, které studentka svou vlastní aktivitou optimalizovala a v laboratořích zavedla. Tyto metody umožnily z jednoho vzorku stanovovat celou plejádu metabolitů, které v předešlých používaných postupech vyžadovaly separátní extrakce. Tato diplomová práce poskytuje velmi kvalitní základy pro navazující experimenty spočívající v další optimalizaci metod stanovení a extrakce. Vzhledem k výše uvedeným skutečnostem doporučuji práci k obhajobě a hodnotím ji celkovou známkou "výborně (A)".

Posudek oponenta

Márová, Ivana

Předložená diplomová práce Bc. Evy Šimkové se zabývá optimalizací analýzy beta-glukanů a možností multiparametrické analýzy metabolitů u karotenogenních kvasinek. V rámci práce byl proveden experimentální screening kombinace řady extrakčních postupů pro izolaci a následnou analýzu více typů metabolitů v jednom kroku. Za velmi cennou lze považovat optimalizaci imunochemického stanovení glukanů z kvasinkových buněk využívající menší množství vzorku a podstatně nižší náklady. Práce v rozsahu 94 stran je sepsána v českém jazyce prakticky bez překlepů a chyb. Má klasické členění a je založena na prezentaci a diskusi výsledků. Teoretická část v rozsahu 18 stran poskytuje základní vhled do problematiky metabolismu karotenogenních kvasinek. Teoretická část je zpracována velmi obecně a i když je podložena 42 literárními zdroji, pouze část jsou originální studie zaměřené na problematiku práce, chybí skutečná rešerše izolačních a analytických postupů u karotenogenních kvasinek. Jednotlivé literární zdroje jsou sice citovány správně dle pořadí prvního uvedení v textu, měly by však být uváděny bezprostředně za citovanými fakty, nikoli souborně na konci odstavců, kde není jasné, ke které skutečnosti se jednotlivá citace vztahuje. Citace č. 42 je zbytečná. Celková formální úprava práce není optimální, často jsou vynechány velké kusy stránek, a to i tam, kde text uvedený na polovině strany je následován dalším textem na nové straně (př. str. 24-27). V textu jsou pouze ojedinělé drobné chyby a překlepy, např. diabetes se píše v českém textu s malým počátečním písmenem (str.17). Metoda stanovení proteinů není "dle Biureta", jedná se o reakci s biuretovým činidlem (str.40). Také není třeba zvádět opakovaně běžné chemikálie, které jsou sice použity k více účelům, ale jedná se o tutéž látku (př. dihydrogenfosforečnan sodný, hydroxid sodný, methanol p.a. - kap. 4.1). U kvasinkového kmene je třeba uvést i jméno sbírky a zemi původu. Experimentální část obsahuje podrobný popis metodických postupů včetně designu extrakčních experimentů. Výsledky jsou systematicky řazeny a přehledně uvedeny v grafech a tabulkách. Experimenty na sebe logicky navazují, výsledky jsou průběžně kriticky hodnoceny a postupně využívány k optimalizaci parametrů analýz. Biomasa byla produkována v laboratoním fermentoru, v práci byla využita dále celá řada izolačních, extrakčních analytických a instrumentálních technik včetně imunochemické analýzy. Některé komplexní extrakční procesy poskytují velmi nadějné výsledky, které budou jistě důležitým základem pro navazující studie. Z práce je patrné, že studentka vykonala mnoho časově i technicky náročných experimentů, během nichž získala a vyhodnotila velký objem dat. Data studentka zpracovala do rozsahem i obsahem nadstandardní diplomové práce, která má publikační potenciál i přesah do praxe. S ohledem na výše uvedené skutečnosti doporučuji diplomovou práci k obhajobě a hodnotím ji celkovou známkou "výborně" (A).

eVSKP id 149070